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研究背景及目的:肾细胞癌(RCC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一,约占肾脏恶性肿瘤的90%~95%。常见临床症状有腹部肿块、无痛性血尿、腰痛,但出现这些症状时一般预示着RCC已进入晚期,而RCC患者的预后与诊断时的分期密切相关。目前RCC的诊断主要依靠超声、CT、MRI等影像学检查,确诊率较低。谷氨酸化修饰是蛋白质翻译后修饰的一种,常发生在微管蛋白的α-tubulin或β-tubulin。胞质羧肽酶(CCP6)是调节谷氨酸化修饰的一种酶,其表达不足会导致多聚谷氨酸化产物的累积。DNAJC7蛋白是热休克蛋白的一种,它以ATP依赖的方式调节热休克蛋白(HSP)70和90,发挥分子伴侣的功能。本研究将对多聚谷氨酸化的DNAJC7蛋白在肾癌早期诊断中的作用进行研究。材料及方法:采用RT-PCR、Western Blot、免疫组化的方法测定了RCC患者癌组织及癌旁组织中CCP6 m RNA水平及蛋白表达情况;采用质谱分析确定CCP6的底物以及使用免疫沉淀、免疫印迹等方法鉴定底物的多聚谷氨酸化修饰。进而采用电化学发光免疫分析技术(ECLIA)检测了30位RCC患者、15位肾炎患者、17位肾结石患者及30位健康对照组的血清样本中GT335抗体(可以识别多聚谷氨酸化修饰的蛋白质)的表达量,即底物多聚谷氨酸化修饰的程度,对上述结果进行验证。实验结果:RT-PCR、Western Blot、免疫组化等方法显示RCC患者癌组织中CCP6 m RNA及蛋白表达量均显著下降,通过质谱分析鉴定出CCP6的底物为多聚谷氨酸化修饰的DNAJC7蛋白,但RT-PCR检测癌组织和癌旁组织中DNAJC7 m RNA水平,发现两者并无明显差异,免疫沉淀则显示癌组织中多聚谷氨酸化修饰的DNAJC7蛋白表达显著高于癌旁组织。因此,CCP6可以调控DNAJC7蛋白的多聚谷氨酸化修饰。进一步使用ECLIA法检测RCC患者、不同肾病患者及对照组血清中的多聚谷氨酸化修饰的DNAJC7蛋白表达量,显示RCC患者中其浓度显著高于其他组,且能将RCC患者与肾脏良性病变患者进行区分。因此,多聚谷氨酸化修饰的DNAJC7蛋白可以作为RCC的一个灵敏性、特异性均较高的早期诊断标志物。结论:本研究表明多聚谷氨酸化修饰的DNAJC7蛋白可以作为RCC早期诊断的一种血清生物标志物,其区分早期RCC与其他肾脏良性疾病的能力较好,具有较高的灵敏性和特异性。