目的：由于2009甲型流感病毒已在世界范围内广泛传播,为了尽快监控病毒的传播,有必要研究出有效的快速检测09甲流病毒的方法。WHO于2009年4月推出了荧光定量RTPCR检测09甲流的方法,并于10月作了修改。但随着甲流病毒的传播,基因组也会发生变化,造成WHO推荐的方法灵敏度下降。本实验探索了一种高灵敏度检测09甲流的荧光定量RTPCR方法。方法：通过NCBI Influenza Sequence Database找出中国大陆报告的09甲流HA,NA和MP全长基因序列,并进行比对。从比对结果中分别选出较为保守的区域,将序列输入Beacon Designer 7.6中,分析出引物及探针区域后分别合成这些引物及探针。采用稀释后的09甲流总RNA筛选引物及探针,并将表现最好的一套优化其反应条件。比较新设计的引物和探针与WHO推荐的之间灵敏度和特异性。最后通过83份临床样本RNA验证新设计引物和探针的效果。结果：新设计的引物和探针中编号为HA-3的扩增09甲流表现最好。优化其反应条件后,其检测最低限为2-3个拷贝体外转录09甲流HA基因RNA,比WHO推荐方法高10倍。特异性与WHO推荐的方法表现相似。83份临床样本中新设计的引物和探针检测出32份阳性结果,WHO推荐方法检测出26份阳性结果。结论：新设计的引物和探针中编号为HA-3的具有较好的检测09甲流特性。可用于临床检测09甲流病毒。