几丁质酶是一种能催化真菌细胞壁的重要成分—几丁质降解的糖苷酶，普遍存在于大白菜、烟草等高等植物中，因在抑制真菌的生长增殖、提高植物的抗病性等方面具有重要作用，现已成为当前科学研究的热点之一。本文通过PCR反应及RACE技术，从大白菜基因组DNA及RNA中分别扩增出大白菜几丁质酶全基因及成熟肽基因，并对其进行了生物信息学分析；构建原核表达载体pET-CHB4，通过IPTG诱导并对该基因表达的蛋白产物进行SDS-PAGE分析、生物活性和功能分析。结果表明：1．根据已知十字花科植物几丁质酶基因的保守序列设计特异性引物，以大白菜叶片基因组DNA为模板，通过PCR反应扩增出长度约为1Kb的特异性DNA片段和几丁质酶N端序列片段（150bp）。选取经1mmol．L^-1水杨酸处理后的大白菜植株叶片提取RNA，利用RACE技术扩增该基因的3′端436bp。2．以大白菜叶片基因组DNA为模板，利用PCR反应扩增出长度为1517 bp的几丁质酶全基因；以水杨酸诱导的大白菜叶片RNA为模板，通过RT-PCR反应扩增出长度为811bp几丁质酶成熟肽基因。3．生物信息学分析表明，该几丁质酶基因全长1517bp，其中内含子序列长度为508bp（DDBJ登录号为AB257452），编码由268个氨基酸残基组成的蛋白质（pI／Mw：8.28／28701.23，www.expasy.org）。与其他物种ClassⅣ类几丁质酶氨基酸序列的多重比较表明（DNAMAN），与油菜ClassⅣ类几丁质酶的同源性达99％，与其他已知高等植物ClassⅣ类几丁质酶的同源性达50％以上。说明所克隆的大白菜几丁质酶基因是编码ClassⅣ类几丁质酶的基因。4．构建了原核表达载体pET-CHB4，利用IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析表明，该基因表达的蛋白分子量为-28kD左右，其表达产物主要以包涵体的形式存在。5．通过改变诱导表达的参数发现，25℃的低温并不能改变表达蛋白的可溶性，而在pH9.5的培养基条件下，表达产物的上清液中却有重组蛋白条带出现，表明碱性环境有利于蛋白质的折叠和二硫键的交换。6．以酵母菌为指示菌做抑菌圈试验，结果显示，经不同浓度的IPTG诱导表达的蛋白液处理后，抑菌圈大小变化明显，当IPTG浓度为0.6mmol／L时抑菌效果最佳。7．通过对不同IPTG诱导表达的几丁质酶活力的测定，结果表明，当IPTG浓度为0.6mmol／L时，几丁质酶活力达到最大值2.8U，明显高于原菌液几丁质酶活力1.2U。综上所述，本文成功地从大白菜叶片中克隆出几丁质酶CHB4基因及其成熟肽基因，构建了高效原核表达载体pET-CHB4，优化了该几丁质酶诱导表达的参数，并对该酶进行了功能分析，为该酶的纯化及酶学性质研究提供基本资料，也为进一步转化其他植物，以期获得抗真菌病害的转基因植株提供理论依据。