木薯叶多酚氧化酶的分离纯化及其应用

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本文以木薯叶为研究对象,进行了木薯叶多酚氧化酶的提取、纯化、固定化及其在降解含苯环的水体污染物方面的研究。主要研究内容和结果如下:木薯叶多酚氧化酶的提取方法为:比较匀浆浸提法、丙酮粉法、辅助浸提法对木薯叶多酚氧化酶提取的影响,得出最佳的提取方案是先用丙酮粉法进行前处理,然后用辅助浸提法提取多酚氧化酶。最佳提取条件是:用pH6.6的磷酸缓冲液以1:6的料液比浸提6小时。木薯叶多酚氧化酶的纯化方案为:多酚氧化酶经50%-80%浓度硫酸铵分级沉淀,分子截留量为8-14KDa的透析袋透析除盐、反向透析浓缩后,用Sephadex G-75superfine凝胶过滤层析和DEAE Sephadex A50离子交换层析后得到纯多酚氧化酶,经SDS PAGE检测发现其相对分子质量为66KDa。木薯叶多酚氧化酶固定化的最佳条件为:分别合成MCM-41、SBA-15、SBA-16三种介孔二氧化硅材料,得出对木薯叶多酚氧化酶进行固定化得出最佳固定化条件为:每10mgSBA-16的载酶量为3mL(酶浓度500mg/mL),在pH7.2的PBS中固定3h,然后在0.3%的戊二醛中交联2h。经过固定化后多酚氧化酶的温度稳定性、pH稳定性、和操作稳定性都有了显著提升。Km值由原来的Kml=0.13247mol/L变成固定化后的Km2=0.12135mol/L,底物亲和力有所降低。用SBA-16固定化的多酚氧化酶10h对邻苯二酚的催化降解率为99.36%;对刚果红2h的降解率为96%;对苯酚12h的降解率为93.41%;对2,4-二氯苯酚7h的降解率为83.6%。
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