三唑是含有三个氮原子的五元杂环结构,一般认为,杂环结构属于较强的决定簇,有可能影响半抗原特征分子结构的特异性,因此,目前较少有将杂环作为连接臂的相关报道。本研究将“Click Chemistry’’运用到小分子半抗原的合成中,再通过与载体蛋白偶联,成功合成了具有新型三唑类结构作为连接臂的一系列小分子人工抗原,打破了常规的直链结构的人工抗原合成方法。因此,将三唑杂环作为连接臂的人工抗原的制备路线是有效可行的。我们运用‘’Click Chemistry"法成功合成了两类激素类人工抗原：胺类激素类人工抗原(包括游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3))；类固醇类激素类人工抗原(包括雌二醇、孕酮、睾酮、维生素D2、维生素D3)。其中,我们对游离甲状腺素(FT4)和游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)进行了活性研究。1胺类激素类人工抗原的合成及活性研究游离甲状腺素(FT4)、游离三碘甲状腺原氨酸(FT3)人工抗原的合成及活性研究我们选择羧基(-COOH)为修饰位点,首先用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)保护氨基,再通过酰胺键生成端基炔,利用“Click Chemistry",从而给FT4和FT3接上一个含有三唑结构的戊酸作为连接臂。取上述合成的FT4和FT3半抗原,利用碳二亚胺法与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,经过低温透析,得到相应的FT4和FT3人工抗原。将FT4和FT3人工抗原免疫小鼠,用间接ELISA法测定其抗血清的效价分别为128000,64000,FT3的IC50值为0.37μg/mL。其中FT3的人工抗原活性较好,进一步适用于寻找相应的抗体。2类固醇类激素类人工抗原的合成2.1雌二醇、维生素D2、维生素D3人工抗原的合成我们选择雌二醇、维生素D2、维生素D3的羟基官能团作为修饰位点,在强碱条件下,氧负离子与溴丙炔成醚,再利用“Click Chemistry",与叠氮戊酸生成含有三唑环的半抗原。利用碳二亚胺法与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,经过低温透析,得到相应的人工抗原。2.2孕酮和睾酮人工抗原的合成我们对孕酮和睾酮4位进行环氧化,与叠氮基团发生加成反应,生成4位叠氮取代的孕酮和睾酮衍生物。再通过“Click Chemistry",与5-己炔酸甲酯生成含有三唑结构的半抗原。利用碳二亚胺法与牛血清白蛋白(BSA)进行偶联,经过低温透析,得到相应的人工抗原。3FT4和FT3人工抗原新的路线探索将‘’Click Chemistry"法直接应用于FT4和FT3人工抗原的合成,即首先将牛血清蛋白(BSA)直接与叠氮戊酸偶联,透析；再将FT4和FT3用二碳酸二叔丁酯(Boc2O)保护氨基,再通过酰胺键生成端基炔,最后利用“Click Chemistry",生成的FT4和FT3人工抗原。