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第一部分:帕罗西汀和糖皮质激素对成年大鼠视网膜干细胞增殖的影响
目的:通常成年哺乳动物的视网膜没有神经发生能力,因而视网膜缺乏再生的能力。但是有一小群睫状上皮的神经巢蛋白(nestin)阳性的细胞保留着神经再生的潜能。本研究目的是调查两种药物,糖皮质激素和帕罗西汀对成年大鼠睫状体上视网膜干细胞增殖的影响。
方法:24只成年Sprague-Dawley大鼠被分为4组,每组6只。4组分别给予空白载体、糖皮质激素、帕罗西汀、或糖皮质激素与帕罗西汀混合治疗14天。睫状体细胞上的细胞增殖用溴脱氧尿嘧啶核苷(BrdU)免疫组化的方法来定量。每组每个大鼠的三个切片被用来做定量。对三个切片的睫状体区域在40X高倍镜下照相。BrdU阳性细胞和DAPI(核)-染色细胞被定量。结果用BrdU细胞对DAPI的比率来表示。BrdU和神经干细胞标记物之一Nestin及BrdU和胶质纤维酸性蛋白GFAP的联合标记用来揭示BrdU阳性细胞的表型,治疗结束时测量眼压。
结果:不同治疗组的眼压无显著性差异,而且均在正常范围。对照组睫状体上BrdU标记的细胞比例是2.30±0.32%。糖皮质激素治疗组BrdU标记的细胞数为1.25+0.12%,帕罗西汀治疗组显著的增多的BrdU标记的细胞数为3.63+0.50%,联合治疗组(Px+Cort)的BrdU标记细胞数目为2.66±0.54%。糖皮质激素组与其他三组相比有统计学显著差异(Ctrl:p=0.008;Px:p=0.004;Px+Cort:0.045)。帕罗西汀组与对照组相比有统计学显著差异(p=0.03)。糖皮质激素治疗抑制睫状体的细胞增殖,相反,帕罗西汀治疗增加细胞增殖。用细胞标记物联合标记显示BrdU阳性细胞同时有nestin表达,但没有GFAP表达。
结论:在睫状体的视网膜前体细胞的增殖受帕罗西汀和糖皮质激素的调节,帕罗西汀使之增加,糖皮质激素使之减少。帕罗西汀与糖皮质激素联合用药可以逆转糖皮质激素对增殖的抑制作用。这为进一步研究视网膜干细胞的生物学及视网膜变性类疾病的潜在治疗提供了信息。
第二部分:枸杞多糖对大鼠视网膜干细胞增殖的影响
目的:本研究目的是调查两种剂量的枸杞多糖对成年大鼠睫状体上视网膜干细胞增殖的影响。
方法:18只成年Sprague-Dawley大鼠被分为3组,每组6只。3组分别给予低剂量枸杞子服药组:服药量为1mg/kg,溶于1 ml PBS中,共35天;高剂量枸杞子服药组:服药剂量为10mg/kg,溶于1 ml PBS中,共35天。对照组:口服1 ml 0.01M PBS,共35天。3组共18只大鼠用来做细胞定量。每八张切片取一张贴片。取每组每个大鼠带视神经的三个切片用来做定量。对三个切片的睫状体区域在40X高倍镜下照相,每只大鼠共6个高倍视野照片。Ki-67阳性细胞和DAPI(核)-染色细胞被定量。结果用Ki-67阳性细胞对DAPI的比率来表示。用AONVA来进行所有统计分析。组间的比较使用LSD Post Hoc test。Ki-67和神经干细胞标记物之一Nestin及Ki-67和胶质纤维酸性蛋白GFAP的联合标记用来揭示Ki-67阳性细胞的表型。
结果:Ki-67阳性率与DAPI核标记细胞的比值分别为高剂量枸杞多糖组1.85±0.64%;低剂量枸杞多糖组2.79±0.74%;PBS组1.15±0.27%。在高剂量和低剂量枸杞多糖组,Ki-67阳性率均高于PBS对照组,统计学有显著性差异(P<0.01)。高剂量组与低剂量组相比,低剂量组Ki-67阳性率高,统计学有显著差异(P<0.01)。用细胞标记物联合标记显示Ki-67阳性细胞同时有神经巢蛋白Nestin表达,但没有GFAP表达。
结论:枸杞多糖对体内睫状体的视网膜干细胞的增殖有促进作用,这为进一步体外扩增视网膜干细胞的研究及视网膜变性类疾病的潜在治疗提供了信息。