c-Myc基因的重排、拷贝数扩增和异常高表达可以抑制细胞老化--机体对抗细胞癌变的主要屏障之一。一般认为，降低c-Myc在正常成纤维细胞或肿瘤细胞中的表达丰度均能够诱发老化进程，然而其介导的信号通路尚不完全清楚。通过运用蛋白质组学方法，我们已发现在c-Myc低表达的TRE293细胞中，Bcl-2相关抗死亡基因2(BCL2-associatedathanogene2，BAG2)的蛋白质丰度明显升高，但是BAG2和c-Myc的相互作用机制尚不得而知。本课题以BAG2为研究目标，在确定了BAG2在c-Myc-shRNA诱发老化表型中的生物学功能的基础上，试图解析BAG2是如何调节c-Myc诱导的老化过程。　　 我们首先在c-Myc异常表达的细胞中研究了BAG2基因的表达和可能的调节机制。采用RT-PCR和Western bolt，我们发现c-Myc的基因表达水平与BAG2的mRNA和蛋白质的丰度负向相关，提示BAG2可能是c-Myc转录抑制功能的靶标基因。利用c-Myc和SP1特异抗体的染色质免疫共沉淀和重组SP1蛋白质的凝胶电泳迁移率，我们观察到c-Myc抗体能够富集具有SP1结合位点的BAG2启动子片段；进一步的分析显示，c-Myc蛋白与结合在BAG2启动子上的SP1形成复合物，抑制BAG2基因的转录活性。在TRE293细胞和H520细胞中，我们系统评价了BAG2高表达对细胞行为的影响，发现外源表达BAG2能够引起细胞老化，降低肿瘤细胞的致瘤性；而在c-Myc表达抑制诱发的TRE293老化细胞中，BAG2表达水平的下调则能够明显削弱老化表型。基于这些结果，我们可以得出如下结论：降低c-Myc基因的表达丰度能够促进SP1对BAG2基因的转录活性，而且BAG2的蛋白质丰度与细胞老化密切相关，因此BAG2是c-Myc诱发细胞老化过程中的一个重要介导因素。　　 我们较为全面地分析了BAG2异常表达对经典老化通路结点分子的影响及机制。采用Western blot和RNAi的方法，我们发现在BAG2高表达诱发的细胞老化中，p21CIP1是一个关键结点分子。我们还检测了BAG2对p21CIP1 mRNA丰度和蛋白降解速率的影响，发现BAG2在mRNA水平对p21CIP1进行调控。运用携带p21CIP1启动子上p53结合位点的报告基因系统，我们进一步证明了BAG2高表达能够增强p53对p21CIP1的转录活性；而在p53基因敲除的细胞中，BAG2依然能够上调p21CIP1的表达水平，这说明BAG2可以通过依赖/不依赖于p53的多种分子机制上调p21CIP1基因的转录水平。利用带有组氨酸标签的人重组BAG2蛋白分离细胞全蛋白，我们鉴定出p53及其转录功能相关蛋白--网格蛋白重链(clathrin heavy chain，CLTC)均可以与BAG2蛋白发生相互作用。在BAG2高表达的细胞中，p53和CLTC的细胞核定位明显增加。这意味着促进上调p21CIP1基因的(共)转录因子的核转位是BAG2激活p21CIP1老化通路的一种机制。因此我们假设，BAG2可以与p53及其相关蛋白质相互作用，并通过p53转录复合物的细胞核转位来提高p21CIP1基因的转录水平，激活细胞老化通路。