论文部分内容阅读
油茶叶为山茶属油茶(Camellia Oleifera Abel.)的叶子,研究表明其含有脂肪、蛋白质、还原糖、酸、氨基酸、茶皂素、叶绿素以及黄酮类化合物等多种成分,营养丰富。目前以油茶叶为原料的研究大都局限在以总黄酮为指标对不同提取方法进行工艺优化,进而将醇提物或经初步纯化的提取物做抗氧化或抑菌性质研究,很少有文章对其醇提物中具体成分进行深入探究。基于此,本文将以油茶叶为原料,重点研究油茶叶醇提物的分离纯化方法,并对纯化得到的单体物质进行结构鉴定。具体内容及结论如下：1)油茶叶黄酮类化合物提取工艺优化及其抗氧化能力探究本试验以芦丁标准品为对照,以提取的油茶叶总黄酮含量为指标,对超声波辅助提取工艺进行了单因素及正交优化,并测定了最佳工艺下提取物对DPPH自由基、ABTS自由基和羟自由基的清除率。结果表明：用50%乙醇溶液,超声提取2次,每次超声处理30 min、料液比1：20,温度70℃,超声提取效果最佳；油茶叶乙醇提取物具有很强的DPPH自由基、ABTS自由基及羟自由基清除活性,IC50分别为15.117 μg/mL,24.141μg/mL、0.561 mg/mL,在一定浓度范围内其清除率与浓度呈正相关。2)油茶叶50%及80%乙醇提取物分离提纯工艺研究本试验将D-101大孔树脂层析、硅胶柱层析和HPLC半制备三种方法结合起来分离油茶叶50%及80%乙醇提取物。文章首先采用高效液相色谱法对大孔树脂的载样量、各洗脱梯度洗脱体积进行了确定,并根据HPLC检测结果将洗脱液合并。其次确定了硅胶层析的洗脱梯度及洗脱体积,最后将硅胶层析得物采用HPLC半制备得到了高纯度的化合物。试验结果表明：D-101大孔树脂的最佳上样量为3BV,纯水、20%乙醇、50%乙醇、80%乙醇的洗脱梯度依次为2 BV、6BV、2BV、2BV;其中50%-80%乙醇洗脱段的物质最适宜的硅胶洗脱梯度为二氯甲烷：甲醇：水洗脱比例依次为8：1：0.1,7：1：0.1,5：1：0.1,3：1：0.1,2：1：0.1,0：1：0.1及1%的甲酸甲醇溶液。洗脱体积为1BV,3BV,2BV,2 BV,1BV,1BV,1BV;通过HPLC从50%-80%乙醇洗脱段中制备得到9种化合物。3)D-101大孔树脂乙醇50%-80%洗脱部分提取物结构鉴定。本试验首先利用高效液相色谱法对制备得到的9种化合物进行纯度检验,然后采用LC-QTOF-MS和NMR (1H-NMR、H-HCOSY、13C-NMR、DEPT-135、HSQC、HMBC)结合文献资料最终确定的物质结构有：槲皮素、二氢白藜芦醇、槲皮素-3-鼠李糖苷、1-(3’,5’-二甲氧基)苯基2-[4"-O-β-D-吡喃葡萄糖基(6→1)-O-α-L-吡喃鼠李糖基]苯乙烷,其中二氢白藜芦醇是首次在山茶属植物中分离得到。