海南地不容药材质量标准及药理学研究

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:heiefei
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目的:确定海南地不容(hainanensis H.S.Lo et Y.Tsoong)总生物碱类提取工艺,获得总生物碱含量>50%的有效部位,对其有效部位进行抗炎镇痛等药理学研究,并制定海南地不容药材质量标准。  方法:(1)采用001×7型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂富集纯化海南地不容药材中总生物碱,并对各种影响因素进行考察,确定最佳工艺;(2)酸性比色法测定海南地不容总碱含量,研究其可控性及稳定性;(3)通过薄层色谱法海南地不容药材进行定性鉴别,采用高效液相色谱法对海南地不容药材生物碱成分进行含量测定,为其药材质量标准的制定提供一定依据;(4)采用改良寇氏法对海南地不容总碱进行急性毒性试验,测定其半数致死量(LD50);(5)采用小鼠热板法、扭体法及甲醛测痛试验观察海南地不容总碱的镇痛作用;(6)采用二甲苯致小鼠耳肿胀、醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性、棉球诱导小鼠肉芽组织增生、弗氏完全佐剂致大鼠关节炎试验模型观察海南地不容的抗炎作用;(7)通过胸腔白细胞游走试验模型研究海南地不容总碱对炎症渗出液中自细胞数量的影响;(8)应用交叉菜胶致大鼠足肿胀试验模型观察海南地不容总碱对炎性组织中前列腺素E2(PGE2)的含量的影响;(9)通过测定小鼠肾上腺内Vit C含量初步探讨海南地不容总碱抗炎机理。  结果:(1)每8ml阳离子交换树脂对海南地不容总生物碱的吸附量可达186.26 mg,10%氨水乙醇洗脱的解吸附率可达84.72%,通过001×7型强酸性苯乙烯系阳离子交换树脂富集纯化,海南地不容提取物总生物碱含量>50%;(2)酸性比色法测定总碱含量,延胡索乙素在0.04~0.14mg·ml-1浓度范围内与其吸光度值之间线性关系良好(r=0.9997),平均回收率为99.8%,RSD为1.94%(n=6);(3)TLC色谱系统中,延胡索乙素和巴马亭斑点分离效果良好,具专属性,可用于海南地不容药材的定性鉴别;HPLC中盐酸巴马汀、延胡索乙素、防己诺林碱、粉防己碱进样量分别在0.288~2.883,0.0978~0.815,1.44~9.6,0.1164~0.776μg范围内线性关系良好,r值分别为0.9997、0.9999、0.9998和0.9997,平均加样回收率(n=6)分别为97.4%、98.3%、100.8%和97.9%;(4)海南地不容总碱LD50为0.569g·kg-1,95%可信限为0.519~0.623g·kg-1;(5)海南地不容总碱能明显延长热板所致小鼠舔后足时间,减少小鼠的扭体次数,抑制甲醛测痛试验第一、二时相的疼痛强度;(6)海南地不容总碱减轻小鼠耳肿胀,抑制醋酸致小鼠腹腔毛细血管通透性增高及棉球诱导的小鼠肉芽组织增生,抑制弗氏佐剂致大鼠关节炎的原发性病变;(7)海南地不容总碱可有效抑制白细胞游走;(8)海南地不容总碱能明显减少大鼠炎症组织中PGE2含量;(9)海南地不容总碱能明显降低小鼠肾上腺内Vit C含量。  结论:(1)001×7型阳离子交换树脂对海南地不容总生物碱有较强的吸附能力,可用于海南地不容总生物碱的提取纯化;(2)酸性比色法操作简便、快速,结果准确,可用于海南地不容中总碱含量测定;(3)所建立的HPLC及TLC方法可准确地对海南地不容进行定性、定量分析,用于其质量控制;(4)海南地不容总碱镇痛、抗炎作用显著,其机理可能与下丘脑-垂体-肾上腺轴(HPA)调节有关,并有效抑制PGE2的产生与释放。
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