论文部分内容阅读
目的：观察在体外模拟的股骨头坏死微环境对骨髓基质干细胞(bone marrowstromal cells，BMSCs)的增殖以及其成骨分化方面的影响，以及在该模拟微环境下，富血小板血浆(platelet-rich plasma，PRP)对BMSCs的增殖及其成骨分化方面的影响。方法：犬股骨头坏死模型将采用液氮冷冻法进行制造。将获得的股骨头坏死组织完全咬碎后，使用DMEM培养基浸泡后收集股骨头坏死组织浸泡液，以含5%体积分数股骨头坏死组织浸泡液的DMEM培养基模拟股骨头坏死微环境。取第3代生长良好的BMSCs分为5组进行实验：空白组（采用DMEM培养基标准培养）、A组（采用含5%股骨头坏死组织浸泡液的DMEM培养基培养）、B组（采用含5%PRP、5%股骨头坏死组织浸泡液的DMEM培养基培养）、C组（采用含10%PRP、5%股骨头坏死组织浸泡液的DMEM培养基培养）、D组（采用含15%PRP、5%股骨头坏死组织浸泡液的DMEM培养基培养）。分别于干预后第3、6、8天3个时间点上采用MTT法进行细胞增殖活性的检测。干预后第7天进行细胞外碱性磷酸酶（Alkaline phosphatase，ALP）活性的检测，于干预后第10天进行细胞的ALP染色，干预后第19天进行钙结节染色。结果：增殖：MTT检测结果显示在干预后第3、6、8天，A组的细胞均比空白组的细胞表现出更强的增殖活性（P<0.05），B、C、D组的细胞比A组的细胞均表现出更强的增殖活性（P<0.05）。但第3天B、C、D各组间比较无差异，至第6天开始B、C、D各组间比较差异开始具有统计学意义（P<0.05），其中D组细胞增殖活性更强，而B、C组细胞增殖活性相仿。至第8天B、C、D各组间比较差异表现的更为明显（P<0.05），表现为D组细胞增殖活性最强，B组细胞的增殖活性其次，C组细胞的增殖活性最弱。成骨分化：细胞外ALP活性检测、细胞ALP染色、钙结节染色均显示A组细胞与空白组细胞的成骨分化能力无明显差异；B、C、D组细胞与A组细胞比较，仅B组细胞表现出更强的成骨分化能力（P<0.05），C、D组细胞的成骨分化与A组细胞相仿。结论：股骨头坏死微环境对BMSCs的增殖有促进作用，而对BMSCs的成骨分化无明显影响。在股骨头坏死微环境下，PRP对股骨头坏死微环境下BMSCs增殖有促进作用，且PRP浓度越高促进作用越明显，但PRP对BMSCs的成骨分化影响表现在低浓度PRP可对BMSCs产生促成骨分化作用，而中、高浓度PRP对BMSCs的促进成骨分化作用不明显。