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目的:1.探讨血管紧张素(1-7)[Angiotensin-(1-7),Ang-(1-7)]对链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)诱导的糖尿病大鼠认知功能的影响。2.探讨Ang-(1-7)对中枢ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴的影响以及Mas受体在其中发挥的作用。3.探讨Ang-(1-7)对海马CA1区神经元突触结构的影响,对海马区Tau蛋白及淀粉样蛋白的影响。方法:1.SD雄性大鼠随机分为正常组、糖尿病组、Ang-(1-7)组和Ang-(1-7)+A779组。单次腹腔注射STZ(55mg/kg)建立糖尿病模型。血糖持续升高10周后,四个组的大鼠分别进行侧脑室置管术,术后分别每天给予正常组、糖尿病组侧脑室注射人工脑脊液2μl,Ang-(1-7)组侧脑室注射Ang-(1-7)(2.5 nmol,2μl),Ang-(1-7)+A779组侧脑室注射Ang-(1–7)(5 nmol,1μl)+A779(50 nmol,1μl),连续给药2周。2.实验采用Morris水迷宫实验评估大鼠学习记忆能力。3.采用免疫组化和Western blot检测大鼠海马区ACE2/Ang-(1-7)/Mas轴。4.采用透射电镜观察大鼠海马CA1区神经元突触结构。免疫组化和Western blot检测大鼠海马区神经细胞骨架蛋白Tau以及寡聚体,采用ELISA法检测海马区可溶性及不可溶性淀粉样蛋白(β-amyloid peptide,Aβ)。结果:1.水迷宫实验结果显示定位航行试验糖尿病组大鼠逃避潜伏期与正常组相比明显延长,Ang-(1-7)组较糖尿病组缩短了逃避潜伏期。空间探索试验糖尿病组大鼠穿越平台次数和靶象限停留时间比较正常组明显减少,而Ang-(1-7)组增加了糖尿病鼠的穿越平台次数(3.0±0.39vs 1.0±0.33,P<0.01)和靶象限停留时间比(39.39±1.11%versus25.62±3.07%,P<0.01)。2.糖尿病组大鼠海马区ACE2,Mas受体表达较正常组减少,Ang-(1-7)组上调了大鼠海马区ACE2和Mas受体的表达。3.透射电镜显示Ang-(1-7)干预改善了大鼠海马CA1区的神经突触结构。Western blot和免疫组化结果显示Ang-(1-7)干预下调了大鼠海马区Tau蛋白在Ser396(P<0.01),Ser404(P<0.01)和Ser202/Thr205(P<0.05)位点的磷酸化水平。ELISA和免疫组化结果显示Ang-(1-7)干预减少了糖尿病大鼠海马区可溶性及不可溶性Aβ1-40和Aβ1-42(P<0.01),减少了Aβ1-42斑块在脑内的形成。Western blot和免疫组化结果显示Ang-(1-7)干预减少了寡聚体的形成。4.Ang-(1-7)所有的神经保护作用几乎可以被Mas受体拮抗剂A779所拮抗。结论:Ang-(1-7)可以改善糖尿病大鼠的认知功能障碍,缓解糖尿病大鼠海马区AD样的病理变化,是一种潜在的糖尿病认知功能障碍治疗药物。Ang-(1-7)的神经保护作用主要通过激活Mas受体发挥作用。目的1.探讨二甲双胍对db/db小鼠认知功能的影响。2.探讨二甲双胍对db/db小鼠海马区以及高糖诱导的HT22细胞磷酸化Tau蛋白,自噬活性的影响及其分子机制。方法:1.db/db小鼠随机分为糖尿病组,二甲双胍组,二甲双胍+氯喹组,氯喹组,db/+小鼠作为正常对照组。二甲双胍组,二甲双胍+氯喹组,氯喹组分别接受二甲双胍(200mg/kg/d),二甲双胍(200mg/kg/d)+氯喹(10mg/kg/d),氯喹(10mg/kg/d)腹腔注射,正常组和糖尿病组分别接受等量生理盐水治疗,连续给药8周。经高糖DMEM培养基(含糖9g/L)处理的HT22细胞作为体外糖尿病模型,普通DMEM培养基培养的HT22细胞作为正常对照。2.实验采用Morris水迷宫实验评估小鼠学习记忆能力。3.通过免疫组化,Western blot,免疫荧光的方法检测体内外模型中二甲双胍对磷酸化Tau蛋白表达的影响。4.通过Western blot和透射电镜的方法检测体内外模型中二甲双胍对自噬活性的影响。体内采用氯喹(Chloroquine,CQ),体外采用3-MA作为自噬抑制剂,进一步研究二甲双胍是否通过调节自噬减少磷酸化Tau蛋白。5.体外采用Compound C作为AMPK抑制剂,通过Western blot和透射电镜的方法检测二甲双胍是否通过AMPK调节自噬活性。结果:1.水迷宫实验结果显示定位航行试验二甲双胍组小鼠逃避潜伏期与糖尿病组相比明显缩短,二甲双胍+氯喹组较二甲双胍组相比延长了逃避潜伏期。空间探索试验二甲双胍组小鼠穿越平台次数和靶象限停留时间较糖尿病组明显增加(P<0.05),而与二甲双胍组小鼠相比二甲双胍+氯喹组减少了穿越平台次数和靶象限停留时间(P<0.05)。2.二甲双胍治疗减少了db/db小鼠海马区及高糖诱导HT22细胞p-Tau(Ser396),p-Tau(Ser404),AT8(Ser202/Thr205)的表达水平(P<0.01)。3.二甲双胍上调了db/db小鼠海马区及高糖诱导HT22细胞的自噬活性,阻断体内外自噬流后,二甲双胍缓解db/db小鼠海马区及高糖诱导HT22细胞p-Tau(Ser396),p-Tau(Ser404),AT8(Ser202/Thr205)的作用被明显阻断(P<0.01)。4.二甲双胍上调了db/db小鼠海马区及高糖诱导HT22细胞AMPK的活性(P<0.01)。Compound C显著阻断了二甲双胍激活高糖诱导HT22细胞自噬的作用。结论:二甲双胍可以改善db/db小鼠的认知功能障碍,减少db/db小鼠及高糖诱导HT22细胞的磷酸化Tau蛋白。其保护效应主要通过激活AMPK上调细胞自噬活性发挥作用。