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背景和目的胃癌是我国常见的恶性肿瘤之一,且五年生存率较低。早年发病胃癌（Early-Onset Gastric Cancer,EOGC）是指发病年龄≤45岁的胃癌,其常因延误诊断而导致肿瘤进展。近年研究表明女性青年胃癌呈现增加的趋势。EOGC在性别上、临床特点、内镜下表现、病理特点及预后方面均较传统胃癌有显著的不同,提示EOGC为一种特殊类型的胃癌。由于EOGC较传统胃癌环境毒素接触少,故遗传因素可能在其发病中占有重要地位。家族性胃癌（Familial Gastric Cancer,FGC）是指具有家族聚集现象的胃癌,遗传性胃癌（Hereditary Gastric Cancer,HGC）是指FGC中由特定基因突变导致的胃癌。EOGC中FGC 比例较传统胃癌高,故我们迫切需要找出EOGC的遗传背景,以达到早期诊断及早期治疗的目的。遗传性弥漫型胃癌（Hereditary Diffuse Gastric Cancer）是目前研究最彻底的胃癌综合症,符合其临床诊断标准的患者中约30-50%存在CDH1基因胚系突变,然而该基因的突变频率在胃癌高发国家及胃癌低发国家比例不一。目前为止关于EOGC的遗传背景及雌激素/雌激素受体是否在其发病中起作用还不清楚。因此,本研究拟通过我院11年期间收治的≤40岁EOGC患者总结出EOGC发病特点,并选取典型家系行全基因组测序分析其基因突变情况,同时进行系列体外实验来验证胃癌是否为雌激素依赖性肿瘤。方 法1、调取我院病理科2004年1月至2014年12月收治的所有胃癌患者,选取所有≤40岁胃癌及250例老年胃癌,收集临床病理内镜资料,并随访患者的生存状态及详细家族史,统计分析两组患者的差异。2、免疫组化及 Western Blotting 检测 EOGC 中 E-cadherin、ERα、ERβ 及 p53定位及蛋白水平表达,同时分析其与临床病理资料及预后的关系。3、选取EOGC中两个遗传背景较明显的家系（共四例患者）行全基因组测序,同时应用生物信息学方法分析各类遗传变异,结合TCGA数据库以及与既往文献比对得出频发的胚系突变。4、使用 Western Blotting 检测人胃癌细胞株 AGS、HGC27、MKN45、NCI-N87、KATO-Ⅲ及人永生化正常胃上皮细胞株GES-1的ERα、ERβ及Tffl蛋白表达水平,免疫荧光测定AGS中其细胞内定位。使用ESR2基因的特异性siRNA转染胃癌细胞后,通过平板克隆形成试验及软琼脂集落检测细胞增殖能力的变化,采用Annexin V/PI凋亡检测试剂盒检测凋亡,Western Blotting检测凋亡相关标记物蛋白水平的变化。使用p53野生型细胞株KATO-Ⅲ转染siESR2后采用Annexin V/PI检测凋亡,Western Blotting检测凋亡相关标记物蛋白水平的变化。检测三株细胞株中Gadd45α蛋白水平变化。使用电镜检查,荧光检测及蛋白水平检测细胞自噬水平,使用自噬抑制剂观察细胞凋亡情况,最终检测MAPK通路的变化。结果EOGC较传统胃癌为女性（65.1%VS 28.8%,P<0.05）、弥漫型胃癌（79.4%VS29.2%,P<0.05）多见。FGC占总体EOGC 1/4,在临床病理学特点上两者无差异。EOGC中有51.1%患者存在Hp感染,且Hp感染与Lauren肠型胃癌及浸润浅层（pT1及pT2）强相关。EOGC的独立危险因素包括:CA72-4及CA125水平增高,切缘阳性及晚期肿瘤。免疫组化及Westem Blotting显示EOGC中E-cadherin癌组织明显减少,ERα及ERβ表达癌较癌旁组织增多,p53突变率高,ERβ阳性更多见于青年患者（33.6 VS 35.3,P=0.005）及进展期肿瘤（pⅡ,pⅢ,pⅣ,P=0.009）。同样p53阳性更多见于青年患者（32.2VS34.6,P<0.01）及进展期肿瘤（P<0.01）。p53阴性患者预后明显优于阳性患者。全基因组测序结果显示两例胃癌家系中并无CDH1、TP53基因突变,较有意义的突变为LILRA4 c.953-2A>G。最终雌激素受体研究方面,体外实验证实胃癌细胞在低剂量雌激素作用可引起ERK1/2激活,而ERβ是胃癌中主要亚型,siRNA敲减ESR2表达后胃癌细胞出现增殖抑制、凋亡增加及自噬增加的现象,抑制自噬后可抑制凋亡的增加,故siESR2后引起MAPK通路激活,进而激活Gadd45α,促进自噬及凋亡。结 论EOGC为不同于老年胃癌的特殊类型肿瘤,其以女性弥漫型胃癌为主,分化差、生物学恶性度高,存在CA72-4及CA125水平增高的患者预后较差,如果EOGC在可切除范围内则预后较好。分子病理学特点上EOGC同样伴随E-cadherin的缺失及p53的突变,同时ERα及ERβ在其发病中起癌基因的效应,以ERβ表达为主。p53阴性患者预后优于p53阳性患者。全基因组测序显示四例患者无CDH1、TP53胚系突变。低剂量的雌激素水平可引起胃癌细胞微弱的增殖效应,干扰ESR2基因后可抑制胃癌细胞的生长。综上所述,在EOGC临床处理中,早期诊断并手术治疗是关键,同时雌激素受体调节剂可能为EOGC中ERβ过表达的患者起到治疗效果。