【摘 要】
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青霉素G酰化酶(Penicillin GAcylase，PGA，EC．3．5．1．11)是医药工业关键用酶。粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)比其他来源的PGA具有更好的热稳定性、底物亲和力与旋光选择性。本文采
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青霉素G酰化酶(Penicillin GAcylase，PGA，EC．3．5．1．11)是医药工业关键用酶。粪产碱杆菌青霉素G酰化酶(AfPGA)比其他来源的PGA具有更好的热稳定性、底物亲和力与旋光选择性。本文采用Eupergit C、ZH．EP、ZH-HA等三种环氧载体进行AfPGA的固定化研究，并从中寻找具有工业价值的新载体。考察了AIPGA在三种载体上的固定化规律，研究了初始加酶量、固定化时间、温度、pH、缓冲溶液浓度、保护剂等对固定化酶表观活性、表观活力回收等方面的影响。初步确定了最适固定化条件为：EupergitC：20mg蛋白／g湿载体、150h、室温、pH8.0、0.5M缓冲溶液、0.25％(w/v)PAA；ZH-EP：40mg蛋白、g湿载体、48h、室温、pH8.0、1.5M缓冲溶液、0.25％(w/v)PAA；ZH-HA：20mg蛋白/g湿载体、12h、室温、pH8.0、1.5M缓冲溶液、0.25％(w/v)PAA。
三种固定化酶的最适pH分别为Eupergit C：8.43；ZH-EP、ZH-HA：10.0。最适温度Eupergit C-59℃；ZH-EP、ZH-HA：55℃。固定化酶在pH5.0～11.0间、45℃以下活性稳定。表观米氏常数Km分别为Eupergit C：13.1 mmol/L；ZH-EP：10.6mmol/L：ZH-HA：5.9mmol/L。最大反应速度Eupergit C：0.41mmol/min*g；ZH．EP：0.25mmol/min*g：ZH-HA：0.1mmol/min*g。在34℃水解10％青霉素G钾盐溶液，各40批后活性保留超过86％。固定化酶的各项性能都好于游离酶，ZH-HA制备的固定化酶的性能与Eupergit C制备的难分伯仲，是一种适合工业应用的载体。
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