克隆得到抗冻蛋白（antifreeze protein，AFP）基因，并通过农杆菌介导法将它导入杨树，培育抗寒冻的杨树新品种是本研究的主要目的。研究内容如下： 首先利用RT—PCR方法从胡萝卜中克隆到抗冻蛋白基因，并构建了植物表达载体PBI—AFP，采用电转化法将PBI—AFP质粒转入根癌农杆菌EHA105中，构建了双元转化载体。经生根筛选及PCR检测，证明胡萝卜AFP基因已整合入烟草基因组。该工作证明了构建的载体是正确的并在植物中是有效表达的，这为培育高度抗寒耐寒作物、树木新品种提供基础，也为进一步研究抗冻蛋白基因的表达及其功能奠定了基础。 本实验建立了山杨（Populus. davidiana Dode）叶片高效再生系统，选择激素浓度、基础培养基、琼脂浓度、蔗糖浓度等因素进行比较，实验表明：WP+6—BA1.0mg／L+NAA0.05mg／L+0.8％琼脂+2.0％蔗糖为最佳诱导山杨叶片不定芽分化的培养基，分化率达95％以上。通过卡那霉素敏感性实验，确定山杨叶片分化与根系对卡那霉素的忍耐极限分别为50mg／L，15mg／L。 在建立山杨叶片高频再生系统的基础上，利用农杆菌介导叶盘法开展了AFP基因转化杨树的研究。确立了山杨叶片高效的遗传转化体系：将山杨叶片剪成1.0cm×0.5cm大小，预培养2—3d；菌液浓度为OD₆₀₀=0.4—0.5；侵染时间为8—10min；共培养3d。经过叶盘不定芽诱导的卡那霉素60mg／L、80mg／L 90天连续筛选，获得4株卡那霉素抗性植株，其中一株，经PCR检测为阳性，初步证明AFP基因已转入山杨中。