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玉米赤霉烯酮(Zearalenone,ZEN)又称F—2毒素,是由镰刀菌属真菌在玉米、谷物上的生长过程中所产生的次生代谢产物,该毒素具有雌激素活性,严重影响哺乳动物的生殖器官及其功能。该毒素不仅可以污染谷物、饲料,对动物造成毒性,而且还可以通过污染或残留ZEN的肉、乳等动物源性食品进入人体,给人的健康造成威胁。由于ZEN是一种小分子半抗原,本研究采用化学方法将ZEN—O—羧甲氧肟分别与牛血清白蛋白(BSA)和卵清白蛋白(OVA)偶联合成人工完全抗原ZEN—BSA和ZEN—OVA,ZEN—BSA中ZEN、BSA两者的偶联摩尔比为6:1。用ZEN—BSA免疫BALB/c小鼠,通过间接ELISA检测免疫小鼠体内的抗体产生情况,鉴定出ZEN—BSA偶联物有较好的免疫原性。 以50μg ZEN—BSA免疫8周龄BALB/c小鼠,每隔两周免疫一次,共免疫四次,经尾静脉加强免疫后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0—Ag—14融合,以ZEN—OVA为检测原,结合ZEN—BSA和BSA筛选出三株分泌抗ZEN单克隆抗体的杂交瘤细胞株,分别命名为2C7、3B10和3D5。以ZEN—BSA为包被原,采用间接ELISA测得2C7、3B10腹水效价均≥1:1x10~6,而3D5腹水效价只有1:10240;以ZEN—OVA为包被原,测得2C7、3B10腹水效价为1:1600,而3D5腹水效价>1:1x10~6。经亚类试剂盒鉴定,2C7、3D5单抗属于IgM亚类,3B10单抗属于IgG2b亚类。阻断ELISA结果表明,2C7、3B10和3D5三株单抗都具有ZEN特异性。 以获得的2C7、3B10和3D5单抗为基础,用HRP—ZEN偶联物作为竞争抗原,建立了竞争ELISA方法,初步组装成试剂盒,用于ZEN的免疫学检测。结果显示,以2C7、3D5分别包被96孔酶标板建立的竞争ELISA方法,其最低检测限分别为1ng/ml和25ng/ml,而以3B10包被96孔酶标板建立的竞争ELISA方法最低检测限高达100ng/ml。以获得的单抗2C7和3D5为基础建立了阻断ELISA方法并建立了标准曲线,从标准曲线推断,他们的最低检测限分别为0.1ng/ml和1ng/ml,它们检测的线性范围分别为0.1—10ng/ml和1—100ng/ml。