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背景:随着社会的进步、中国老龄化的出现,缺血性脑血管病的发病率日益升高,其死亡率高、致残率高,严重危害人类健康和生命。因此研究缺血性脑血管病的损伤及修复机制非常重要。既往研究表明脑缺血后尽快恢复缺血区的血供,挽救濒死的神经元、神经胶质细胞和血管内皮细胞是治疗缺血性脑血管病的关键,以血管修复及再生作为切入点,促进脑缺血区血管生成为临床治疗的一个重要方面。脑缺血后血管再生的研究热点是VEGF-A,作为同一家族成员的PLGF却在缺血性脑血病中研究较少。PLGF最初被认为与胎盘绒毛的血管新生和维持胎盘的生长及发育有关。现在已发现PLGF在心肌缺血、肿瘤、炎症及创伤愈合等病理条件下与血管再生密切相关。故本实验在SD大鼠局灶脑缺血/再灌注模型及电针干预下观察缺血区大脑皮质PLGF及其受体Flt-1 mRNA和蛋白表达的变化规律,研究PLGF/Flt-1在局灶脑缺血/再灌注后的作用并进一步探讨电针促进局灶脑缺血/再灌注脑内血管再生的机制。目的:1、探讨SD大鼠局灶脑缺血/再灌注后及电针干预下缺血侧PLGF及Flt-1时空表达规律;2、探讨PLGF及Flt-1在SD大鼠局灶脑缺血/再灌注后血管再生的作用;3、探讨电针促进SD大鼠局灶脑缺血/再灌注后缺血侧血管再生机制的研究。方法:雄性SD大鼠,随机分为正常组(NC组)、模型组(I/R组)、电针组(I/RE组),通过改良线栓法制备大脑中动脉局灶脑缺血2h/再灌注模型,将模型组和电针组分为局灶脑缺血2h再灌注ld、3d和7d三个亚组,取双侧“合谷”穴(LI 4)为电针刺激穴位。通过HE染色来了解局灶脑缺血/再灌注后脑组织的病理学变化;通过TTC染色观察局灶脑缺血/再灌注后脑梗死体积的变化;神经症状学评分了解局灶脑缺血/再灌注后各个时间点大鼠神经功能缺损情况。采用免疫组化法检测胎盘生长因子(PLGF)和受体(Flt-1)蛋白在缺血区大脑皮质分布及其表达;RT-PCR法检测缺血区大脑皮质PLGF mRNA和Flt-1 mRNA的表达;Western blot法定量检测缺血区侧大脑皮质PLGF蛋白表达。结果:1、SD大鼠造模及电针刺激后,在各个时间点大鼠均出现神经功能缺损。在局部脑缺血/再灌注后1d、3d、7d,I/R组与I/RE组大鼠神经症状学评分逐渐减小;与I/R组比较,I/RE组1d、3d神经症状学评分减小,但无统计学意义(P>0.05),I/RE组7d有显著性差异(P<0.05);2、TTC染色结果示I/R组与I/RE组都有白色的梗死灶;与I/R组比较,I/RE组缺血侧脑梗死体积减小,差别有显著性(P<0.05);3、免疫组织化学结果显示PLGF阳性细胞胞浆黄染,在大脑皮质、海马等部位表达,主要见于神经胶质细胞、血管内皮细胞、神经元。NC组有少量的PLGF阳性细胞表达。与NC组比较,I/R组各时间点PLGF阳性细胞增多,1d表达已明显增多(P<0.01),3d表达有一峰值(P<0.01),7d仍高于正常组(P<0.05);I/RE组各时间点PLGF阳性细胞明显增多(P<0.01)。与I/R组比较,I/RE组1d、3d、7d PLGF阳性细胞增多更明显(P<0.01),峰值仍在3d。4、免疫组化检测结果显示Flt-1阳性细胞胞浆黄染,大脑皮质、海马、脑室旁周围组织的血管内皮细胞、神经元都有表达。NC组大脑组织Flt-1阳性细胞表达极少;与NC组比较,I/R组1d表达已经升高(P<0.01),3d表达达高峰(P<0.01),7d表达开始回落,但仍有较高表达(P<0.01);I/RE组Flt-1细胞表达增多(P<0.01),其表达部位及规律同I/R组,高峰仍在3d。与I/R组相比,I/RE组1d Flt-1阳性细胞数增多,但无统计学意义(P>0.05),I/RE组3d、7d Flt-1阳性细胞数增多更明显,具有统计学意义(P<0.01);5、RT-PCR法检测大脑缺血区皮质PLGF mRNA的表达。结果显示,NC组PLGF mRNA有微量表达,I/R组和I/RE组各时间点PLGF mRNA表达高于NC组(P<0.01),且PLGF mRNA成一单峰表达,峰值在3d。与I/R组比较,I/RE组1d PLGF mRNA表达增加(P<0.05),I/RE组3d、7d表达增加更明显(P<0.01);6、RT-PCR法检测大脑缺血区皮质Flt-1 mRNA的表达。结果显示,NC组有微量Flt-1 mRNA表达;与NC组比较,I/R组Flt-1 mRNA于1d、3d表达逐渐升高(P<0.01),7d开始回落,但仍高于正常组,具有统计学意义(P<0.01);I/RE组时间点表达增高更明显(P<0.01)。与I/R组相比,I/RE组各时间点Flt-1 mRNA表达升高,差别具有显著性(P<0.01);7、Western blot定量检测PLGF蛋白结果显示,在正常大脑组织内PLGF有少量表达;与NC组相比,I/R组各时间点表达增高,于再灌注1d开始升高(P<0.01),3d时达到高峰(P<0.01),7d仍高于正常组,但无统计学意义(P>0.05);I/RE组各时间点表达明显增高,差别有显著意义(P<0.01)。与I/R组相比,I/RE组1d增高,但无统计学意义(P>0.05),I/RE组3d、7d差别具有显著性(P<0.01),于3d时表达达高峰。结论:1、电针“合谷”穴可通过促进SD大鼠局灶脑缺血/再灌注后缺血区的血管再生而改善大鼠神经功能评分和脑梗死体积;2、电针“合谷”穴可通过上调SD大鼠局灶脑缺血/再灌注大鼠缺血区大脑皮质的PLGF和Flt-1的表达而促进缺血区大脑皮质的血管再生;3、PLGF及受体Flt-1在SD大鼠局灶脑缺血/再灌注后缺血区血管再生中发挥着重要的作用。