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背景 众所周知，器官移植已逐渐成为终末期器官功能衰竭病人最佳甚至唯一的治疗方案。而同种异体排斥反应是一个长久以来一直困扰着器官移植领域的难题。虽然，随着外科技术的改进、新型器官保存液的研发，尤其是新型免疫抑制剂的应用，临床同种异体排斥反应的发生率已大大减低，临床器官移植的长期存活率已经得到一定改善。但是，尽管临床器官移植患者长期、正规地应用免疫抑制剂，却仍有相当一部份病人在移植术后发生了同种异体排斥反应，而致移植器官失功。因此，同种异体排斥反应以前是、现在仍然是器官移植的主要障碍。同种异体排斥反应的实质是T细胞活化。白介素2(Interleukin-2，IL-2)作为T细胞生长因子，在T细胞活化的一系列事件中起着关键的作用，长期以来一直认为是T细胞活化不可缺少的。然而，最近的一些研究发现，即使在IL-2／IL-2受体(IL-2R)信号传导通路被完全阻断后，同种异体移植器官中排斥反应仍可发生。有人以IL-2基因敲除(knockout)小鼠进行研究，亦得到了相同结果。于是，有人大胆推测，可能存在一种独立于IL-2／IL-2R信号传导通路以外的细胞因子，亦能够活化T细胞，进而导致排斥反应的发生。 IL-15是一种近年刚发现的非淋巴细胞源性细胞因子，在结构或生物学功能上都与IL-2很相似，可以通过IL-2R β及γ传递信号，也能促进T细胞增殖，对T细胞也有趋向作用等。与IL-2不同的是，IL-15并非来自活化的T细胞，它的来源 浙江大学硕士学位论文相当广泛，如上皮细胞、单核细胞、骨骼肌细胞及胎盘中均可检测到高小平的IL一巧mRNA，心、肺、肝和肾等组织中也有一定水平的IL一巧mRNA表达.其中，产生IL一15最多的细胞是外周血单核细胞(peripheral blood mononuelear eell，PBMC)、上皮细胞及成纤维细胞.IL一15在炎症反应尤其是自身免疫反应中的重要作用已被充分证明.最近有研究发现在IL一2月L一ZR信号传导通路已被完全阻断但仍发生了排斥反应的移植物中发现了高水平的IL一15mRNA.因此，IL一巧极有可能在IL一2八L一ZR信号传导通路被阻断后，替代了IL一2的角色，激活了T细胞，进而导致排斥反应的发生.为了验证这一假设，本研究应用小鼠腹腔内异位心胜移植模型，通过应用病理学、RT一PcR、westem一blotting等分子生物学实验枝术手段，探索IL一巧分子途径在同种异体移植物急性排斥反应中的表达情况及其意义.同时探索免疫抑制剂环抱霉素A(CyclosporineA，csA)和他克莫司(Tacrolimus，FK506)，能否有效抑制急性排斥反应时小鼠心脏移植物中IL一巧分子的表达。 方法 C57BL/6和Balb/c小鼠作为移植供体，Balb/。小鼠作为移植受体，建立小鼠腹腔内异位，‘脏移植模型。按移植前后处理方法不同，随机分为4组:A组为Balb/c一Balb/c同基因对照组，移植前后未作处理;B组为C57BL瓜Baib/c急性排斥组，移植前后未作处理;C组为C57BU6一Balb/c异基因移植csA组(e57B珑一Balbze+es助，移植日开始给予环抱霉素A(es^)lo.omg·kg’’·‘，腹腔注射/14天;D组为C57BL/6一Balb/c异基因移植FK506组(C57BL/6一Balblc+FK5o6)，移植日开始给予他克莫司(Tacrolimus，FK5o6)l.omg·kg.，·d一，天复腔注射、14天.移植后1、3、5、7天切取移植心脏用于病理学检测、移植心脏组织中基因产物及蛋白产物IL一15、IL一2、TNF一a、IFN一Y等使用逆转录聚合酶链式反应(RT一PcR)及蛋白印迹法(westem一blo衍ng)分析.另外设亚组观察移植术后一般情况和移植心存活时间。 实验所得数据的统计学处理用SPSSIO.0软件完成。各组受体移植心脏存活时间的组间比较以Kaplan一Meier法检验，其它参数作Inde伴ndent-~pleT检验及One一wayANovA分析，p<0 .05为差异有显著性.浙江大学医学院附属第一医院浙江大学硕士学位论文 结果 Balb/c一Balb/c组小鼠及移植心均获长期存活(大于100天)，C57BL/6一Balb/c组移植，心存活时间8士0.816天，C57BL/6一Balb/e+CsA和C57BL/6一Balb/e+FK506组移植心存活时间分别为20.167土4.355天和1 7.333士2.066天，与C57BL/6一Balb/c组比较，移植心存活时间都明显延长。Balb/c一Balb/c组各个时间段移植心病理学检查均未发现排斥现象，C57BL/6一Balb/。组术后第3天后移植，‘肌间有明显的淋巴细胞浸润，C57BL/6一Balb/e+CsA组和C57BL/6一Balb/e+FK506组小鼠术后3、5、丁天心肌间淋巴细胞浸润程度较C57BL/6一Balb/c组明显减轻.移植心脏基因产物RT一PCR结果显示，Baib/c一Balb/c组各时间点移植心脏标本内IL一巧mRN.入及TNF一a mRNA表达水平较弱，而IL一2 mRNA的表达未检测到。C57BL/6一Balb/c组各时间点移植心标本内均有明显的IL一巧mRNA和INF一a mRNA的表达，3天上升，5天达到高峰，7天下降;IL一ZmRNA在第1天无表达，而后亦于3天上升，5天达到高峰，7天T降.C57BL/6一Balb/e+CSA组和C57BIJ6一Balb/e+FK506组移植后IL一15mRNA、丁NF一a mRNA和IL一2 mRNA表达均受抑制