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研究背景调控细胞周期阻滞和细胞凋亡的锌指蛋白(zinc finger protein which regulates apoptosis and cell cycle arrest,ZAC)基因为抑癌基因,定位于人类染色体6q24-25。ZAC基因编码的蛋白为具有7个锌指结构域的转录因子,可诱导细胞凋亡和细胞Gl期阻滞,从而抑制肿瘤细胞生长。p300是1个具有组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferase,HAT)活性的转录辅因子,可在多个残基乙酰化所有4个核心组蛋白以及70个其它蛋白。前期的研究表明,生长抑素类似物奥曲肽(Octreotide,OCT)可上调胃癌细胞ZAC的表达,ZAC与p300蛋白相互作用,可上调p300-HAT活性,并显著升高组蛋白H3赖氨酸14的乙酰化。研究目的观察p300与OCT对抑制胃癌细胞增殖是否具有协同效应;p300是否可上调胃癌细胞ZAC基因的表达。材料与方法1.野生型p300真核表达载体的鉴定将野生型p300质粒转染至大肠杆菌DH5α。提取质粒DNA,琼脂糖凝胶电泳鉴定,测序鉴定。2.实验分组将胃癌细胞SGC7901和BGC823随机分为4组:实验组1:LipofectamineTM2000转染试剂转染p300质粒;实验组2:终浓度为10nmol/L的OCT培养液,分别作用24h、48h和72h;实验组3:p300转染,OCT孵育(同实验组2);对照组,无p300转染,无OCT处理。3.p300和OCT孵育对胃癌细胞增殖及细胞周期的效应应用MTT法和流式细胞术,观察p300与OCT对胃癌细胞SGC7901和BGC823细胞增殖及细胞周期的效应。4.p300和OCT孵育对ZAC和ac K14-H3免疫反应性的效应应用荧光免疫细胞化学技术观察ZAC和ac K14-H3的免疫反应性(Immuno-reactivity,IR)。5.统计学处理所有数据均以均数±标准差(sx±)表示,应用SPSS17.0统计软件处理数据,P<0.05为差异性有统计学意义。结果:1.野生型p300真核表达载体的鉴定琼脂糖凝胶电泳分析显示,野生型p300质粒DNA片段长度与预期一致。野生型p300质粒序列分析结果与Gen Bank序列一致。2.MTT结果培养24h、48h和72h的胃癌细胞SGC7901对照组A值分别为0.413±0.010、0.725±0.037和0.862±0.012;p300组分别为0.271±0.010、0.274±0.039和0.194±0.025;OCT组分别为0.203±0.044、0.294±0.027和0.404±0.012;p300+OCT组分别为0.216±0.005、0.229±0.017和0.153±0.011。胃癌细胞BGC823对照组A值分别为0.463±0.019、0.782±0.032和0.921±0.050;p300组分别为0.285±0,011、0.230±0.028和0.165±0.006;OCT组分别为0.235±0.032、0.342±0.047和0.408±0.021;p300+OCT组分别为0.195±0.036、0.184±0.023和0.116±0.018。实验组与对照组比较,其细胞增殖能力明显下降(P<0.01),但p300+OCT组与OCT组无显著性差异(P>0.05)。结果表明,p300和OCT均可抑制胃癌细胞增殖,但p300与OCT无协同效应。3.流式细胞实验结果流式细胞术结果显示,实验组处于G0/G1期的细胞数显著高于对照组(P<0.01),同时处于S期的细胞数显著低于对照组(P<0.01),但p300+OCT组与OCT组无显著性差异(P>0.05)。结果表明,p300和OCT均可诱导胃癌细胞细胞周期阻滞,但p300与OCT无协同效应。4.荧光免疫细胞化学结果培养24h、48h和72h的胃癌细胞SGC7901对照组ZAC IR的平均水平分别为0.455±0.038、0.492±0.021和0.495±0.019;p300组分别为0.622±0.026、0.725±0.040和0.735±0.030;OCT组分别为0.534±0.037、0.629±0.039和0.754±0.058;p300+OCT组分别为0.661±0.021、0.732±0.033和0.827±0.025。胃癌细胞BGC823对照组分别为0.379±0.015、0.346±0.013和0.356±0.018;p300组分别为0.576±0.021、0.640±0.001和0.740±0.014;OCT组分别为0.573±0.025,0.671±0.020和0.711±0.015;p300+OCT组分别为0.582±0.021、0.610±0.048和0.829±0.010。实验组ZAC IR的平均水平均显著高于对照组(P<0.01),但p300+OCT组与OCT组无显著性差异(P>0.05)。结果表明,p300和OCT均可上调胃癌细胞ZAC基因表达,但p300与OCT无协同效应。培养24h、48h和72h的胃癌细胞SGC7901对照组ac K14-H3 IR的平均水平分别为0.479±0.015、0.439±0.014和0.354±0.019;p300组分别为0.790±0.016、0.831±0.020和0.489±0.031;OCT组分别为0.562±0.037、0.671±0.020和0.807±0.019;p300+OCT组分别为0.661±0.029、0.685±0.015和0.619±0.023。胃癌细胞BGC823对照组分别为0.416±0.025、0.392±0.021和0.395±0.019;p300组分别为0.831±0.020、0.752±0.032和0.555±0.039;OCT组分别为0.514±0.029,0.649±0.033和0.804±0.059;p300+OCT组分别为0.531±0.038,0.611±0.025和0.734±0.036。结果表明,p300和OCT均可上调胃癌细胞组蛋白H3的乙酰化,但p300与OCT无协同效应。结论1.p300和OCT可抑制胃癌细胞SGC7901和BGC823的增殖,并诱导细胞周期阻滞,但二者无协同效应。2.p300和OCT均可上调胃癌细胞SGC7901和BGC823 ZAC基因表达,但二者无协同效应。3.p300和OCT均可上调胃癌细胞SGC7901和BGC823组蛋白H3的乙酰化,但二者无协同效应。