禽流感病毒（Avian influenza viruses,AIV）具有潜伏周期短、传染性强、传播速度快等特点,在临床中发病率和死亡率较高,并可能导致重大流行病的发生,对公共卫生和家禽养殖业构成了巨大的威胁。因此,开发一种快速、高度灵敏、特异、原位、无损、实时的生物传感器检测方法对于控制禽流感病毒（AIV）的早期扩散至关重要。表面增强拉曼光谱（Surface-enhanced Raman scattering,SERS）具有出色的分辨率、超高的灵敏度,放大信号的能力、以及可以快速、无损的检测样品,还可以提供分子结构振动的指纹图谱信息使得SERS在众多领域应用非常广泛。本研究以筛选禽流感病毒SERS增强基底开展,通过固定禽流感病毒,建立病毒固定后的SERS检测方法,另外引入具有良好的磁响应性的免疫磁珠,最终开发SERS特异性检测禽流感病毒的新方法,为禽流感病毒检测提供一种新的技术手段。本研究的研究内容和研究成果如下:1、SERS增强剂的筛选以及禽流感病毒SERS检测方法的建立以金纳米星（Au NSs）、金纳米笼（Au NCs）、金纳米壳（Au NShs）为SERS增强基底对H3N2亚型禽流感病毒进行SERS检测,最佳增强剂确定为Au NSs。在500-2000 cm-1范围内,H3N2亚型禽流感病毒在1052 cm-1、1456 cm-1、1662 cm-1有较强和良好对称性的拉曼谱峰。对以Au NSs为基底构建的SERS检测禽流感病毒方法进行了条件优化。获得病毒拉曼信号最强的优化条件为:病毒配制缓冲液为10 m M PBS,Au NSs与病毒的孵育时间15 min,Au NSs与病毒1:1体积孵育。本研究构建的方法可在35 min内完成病毒的快速检测,同时制备的10个批次样品峰形峰强均一稳定,原病毒液稀释到10~8倍时仍能检测到拉曼信号。2、基于Au NSs建立化学固定后禽流感病毒SERS检测方法的研究由于病毒微生物的危害,出于生物安全考虑,基于Au NSs为基底,我们通过研究对比多种常见化学固定剂后H3N2亚型禽流感病毒拉曼谱峰,经PCA分析,筛选出最适合用于SERS检测的固定剂为甲醛。接着研究了甲醛对H1N1、H3N2和H5N1三株不同亚型禽流感病毒的拉曼光谱,采用PCA分析基于Au NSs基底可鉴定区分上述三株不同亚型禽流感病毒。本研究构建的方法可在35 min内完成快速检测固定后病毒,同时对基于Au NSs建立化学固定后禽流感病毒SERS检测方法进行评价,三种毒株的SERS谱图重现性良好,固定后原病毒液稀释到10~8倍时均能检测到拉曼信号。3、基于Ag NPs建立SERS免疫磁珠检测禽流感病毒的方法研究我们通过建立IMBM-HA@Ag NPs“一抗三明治”和IMBM-HAP@Ag NPs“双抗夹心式”两种结构原位还原检测H5N1亚型禽流感病毒。应用免疫磁珠分离技术（Immunomagnetic beads separation techniques,IMBS）,将H5N1亚型禽流感病毒HA单克隆抗体与链霉亲和素磁珠偶联制备成免疫磁珠IMBM捕获抗原形成IMBM-HA,结合HA多克隆抗体形成“双抗夹心”复合物IMBM-HAP。并在其表面修饰Ag NPs,包被在IMBM-HA和IMBM-HAP表面形成IMBM-HA@Ag NPs和IMBM-HAP@Ag NPs两种结构。通过对比两种结构SERS谱图,发现后者在1053cm-1的拉曼强度是前者的近7倍。对后者的结构进行了步骤优化,0.2 mg的链霉亲和素磁珠偶联6.8μg的单克隆抗体可使病毒浓度为5.99×10~3 copies/μL的200μL H5N1禽流感病毒富集效率达到53.75%,同时偶联20μg的多克隆抗体,可使样品的在1053 cm-1拉曼强度提高2倍;在Ag NO3和Na BH4浓度都为10 m M分别孵育10 min和5 min时,其在1053 cm-1拉曼强度最高达1232 a.u.。本研究构建的方法与传统拉曼检测相比,引入免疫磁珠,具有很强的特异性,重复性良好,有更高的灵敏度,病毒液稀释倍数达10~9倍,可在1 h内完成对病毒的快速检测。本研究基于微磁粒捕捉系统联合SERS技术,建立的SERS免疫方法检测禽流感病毒的方法可达到原位、无损、高效、特异性强、灵敏度高、快速、低浓度的检测水平,解决了SERS本身特异性的问题,为禽流感病毒提供了一种新的检测思路。