【摘 要】
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本课题设计、合成了5条靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)异柠檬酸裂合酶(isocitrate lyase, ICL)mRNA的特异性10-23脱氧核酶(DNAzyme or deoxyribozyme, D
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本课题设计、合成了5条靶向结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis, Mtb)异柠檬酸裂合酶(isocitrate lyase, ICL)mRNA的特异性10-23脱氧核酶(DNAzyme or deoxyribozyme, DRz),在无细胞体系中筛选和鉴定了上述10-23DRzs对结核分枝杆菌icl mRNA的切割活性,在结核分枝杆菌内验证了10-23DRz对结核分枝杆菌ICL蛋白表达及酶活性的影响,并分别研究了10-23DRz对Mtb在巨噬细胞内和小鼠体内感染的影响,最后探讨了10-23DRz与抗痨药物异烟肼(isoniazid, INH)联合应用治疗小鼠结核病的效果。第一部分结核分枝杆菌icl基因原核表达质粒的构建、表达及rICL的纯化和多克隆抗体的制备目的:构建Mtb icl基因的原核表达质粒,在E.coli中表达后纯化rICL,制备抗rICL的多克隆抗体,为后续研究奠定物质基础。1方法:采用PCR法从Mtb基因组DNA中扩增出icl基因片段,将其插入原核表达质粒pQE30,构建重组质粒pQE30-icl。将pQE30-icl转化大肠杆菌SG13009后用IPTG诱导目的基因表达,免疫印迹法
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