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基因治疗是将限定的遗传物质转入患者特定靶细胞,以最终达到预防或改变特殊疾病状态为目的的治疗方法,其关键问题是基因的输送和基因进入细胞后的表达调控。基于HSP启动子的热诱导基因表达系统具有较低的本底以及时间和空间调控表达的性质,是肿瘤基因治疗中外源基因表达调控的理想选择之一。而另一方面,聚焦超声加热技术(HIFU)的发展使得对于特定组织的加热可以更好的达到预定温度分布和精度,在对于肿瘤热疗的基础上,还可以调控基因表达。在本论文工作中,我们探索了应用HIFU技术进行热疗辅助肿瘤基因治疗的方法。
我们首先克隆了hTNFα基因,得到含HSP70B启动子的热诱导质粒pD3SX-hTNFα,以及作为对照的普通表达质粒gWIZ-hTNFα。并应用HIFU技术,通过对特定组织的加热,启动HSP70B启动子下游的外源基因表达,考察了基因表达与HIFU参数、加热温度,时间等关系,寻找最优表达条件,以及重复启动的可能性。
进而,我们以C57小鼠移植的Lewis肺癌为模型,首次研究了HIFU热疗、局部表达TNFα的免疫基因治疗、以及两者结合的治疗效果。通过组织切片、细胞凋亡、外源基因表达等检查手段,以及肿瘤生长曲线的观察,初步表明了热疗与免疫基因治疗的良好协同作用。
本论文的研究结果,提示了针对肿瘤组织的热疗与基因治疗联合作用的可能性,探索了一条新的肿瘤治疗道路。我们期望,通过进一步优化肿瘤特异性的基因导入和表达调控体系,以及HIFU加热调控的方法,能够实现三维精确定位的针对肿瘤的治疗,成为有效的新的肿瘤治疗方法。