[目的]已有研究表明,甾体激素在生物体的生长、发育、分化、生殖等诸多方面都有重要的调控作用,而这些激素主要是通过.与作为细胞内信号传导与转录因子的特定甾体激素受体蛋白结合,达到调控目的基因表达的作用。雌激素受体(ER)和雄激素受体(AR)都属于甾体激素受体家族的成员,在机体内广泛表达,并介导性激素实现对机体的发育、分化及功能维持的调控,研究发现在个体发育某些时期ER/AR的功能相互拮抗,二者之间的平衡在一些与性别相关的器官发育方面具有重要意义。FKBP52是一种具有肽基脯氨酰顺-反异构酶(PPIase)活性的免疫亲和蛋白,它含有多肽重复序列结构域(TPR),能够介导蛋白与蛋白之间的相互作用。它是一种共伴侣蛋白,能够直接与伴侣蛋白(热休克蛋白Hsp90)结合参与激素-受体复合物(SR complexes)的形成。已有研究表明,FKBP52对多种甾体激素受体(SR)转录活性起到正向调控作用,如雄激素受体(AR)、孕激素受体(PR)等。研究已经证实AR的活性需要FKBP52的PPlase功能,但关于FKBP52对ER/AR平衡影响的报道目前较少,本研究将利用FKBP52基因敲除雄性小鼠,通过对雄性小鼠中乳腺异常发育过程的研究,进而揭示FKBP52在ER/AR平衡中的作用。[方法] FKBP52基因敲除雄鼠中存在类似于野生雌鼠的乳腺异常发育现象,我们通过比较KO雄性小鼠与WT雌鼠乳腺发育过程中形态学和基因表达水平的异同,了解FKBP52在雄性小鼠乳腺发育中对ER/AR平衡的影响。研究工作主要通过以下几个方面的方法进行：1)乳腺的表型分析。我们分别选取了10天、24天和2月龄的同窝野生雌鼠、突变雄鼠的乳头组织以及野生雄鼠相应部位的皮肤组织进行HE染色,同时选取24天和2月龄的同窝野生雌鼠和突变雄鼠的乳腺组织进行HE染色和明矾-洋红染色,以比较乳腺结构和发育情况的异同；2)雌激素诱导实验。为了验证雌激素对乳腺发育的影响,我们选取了24天大小的野生雌鼠和突变雄鼠并对其注射雌激素,每天每只小鼠注射0.05mg雌激素,连续注射14天,明矾-洋红染色实验观察乳腺的发育情况；3)RNA测序。分别提取10天大小的野生雌鼠、突变雄鼠的乳头组织和野生雄鼠相应部位皮肤组织的RNA,进行RNA测序以初步探寻影响乳腺发育的相关基因；4)Real-time PCR实验。我们将提取的RNA逆转录成cDNA,进行Real-time PCR实验以验证ER、AR以及一些相关基因在乳腺中的表达情况；5)免疫组化实验。进一步验证ER、AR以及相关基因在乳腺中的表达分布情况；6)荧光素酶报告检测(Luciferaseassay)实验。用含有雌激素受体结合位点(ERE)的启动子和荧光素酶(luciferase)报告基因的表达质粒转染FKBP52野生型细胞和FKBP52突变型细胞,通过测定荧光素酶的表达量来检测FKBP52缺失对ER活性的影响。[结果]1)FKBP52基因敲除雄鼠存在乳腺异常发育现象；2)FKBP52基因敲除雄鼠乳头结构与野生雌鼠相似,并能形成乳腺导管结构；3)FKBP52基因敲除雄鼠乳腺发育能够正常起始,但随着年龄的增加不能进一步发育；4)雌激素能够诱导FKBP52基因敲除雄鼠乳腺继续发育；5)RNA测序结果揭示FKBP52的缺失在雄性小鼠乳腺中会引起一些与乳腺发育相关基因表达的变化；6)结合RNA-seq结果,通过Real-time PCR和免疫组化实验结果揭示FKBP52基因敲除雄鼠乳腺中ERα表达量升高,同时ERa的表达趋势与FOXA1和CITED1等基因相似；7)荧光素酶报告基因检测实验结果揭示在体外FKBP52的缺失能够使ER的活性增强。[结论]在FKBP52基因敲除的雄性小鼠中,由于FKBP52的缺失,突变小鼠体内ER的活性增强,而AR活性相应降低,使得ER/AR间的平衡偏向ER方面,其中与乳腺发育相关的两个基因FOXA1和CITED1表达明显增加,这可能是造成雄性小鼠乳腺异常发育的主要原因。