抗菌肽是近年来研究发现的新一代抗菌剂，对机体免疫功能等具有重要作用。水生动物抗菌肽的相关研究起步较晚，本文初步研究黄鳝肝脏、肠道等组织粗提物的抗菌活性，在此基础上进一步分离纯化黄鳝肠道和肝脏抗菌肽，并对其相关性质进行研究。共包括以下三个试验。试验一、黄鳝抗菌肽的粗提及其抗菌活性的测定本试验采用Tris-HCl提取法，于腹腔注射不同剂量未灭活的致病性嗜水气单胞菌菌液(1×10~9个／ml)对黄鳝进行诱导，在诱导后的不同时间分别取黄鳝黏液、血液、皮肤、肝脏、脾脏、肠道和肾脏组织，经过组织匀浆、Tris-HCl抽提、冷冻离心等手段分离抗菌肽粗提物，并用抑菌圈法测定黄鳝抗菌肽粗提物的抗菌活性。抑菌圈法检测结果(图1)显示：黄鳝内脏器官以肝脏和肠道的抑菌效果最强，其抑菌圈直径分别为11.83mm和10.82mm。试验二、黄鳝肝脏与肠道抗菌物质的分离纯化本研究选择黄鳝肝脏和肠道粗提物进行纯化，采用Sephadex G-25凝胶柱(柱规格1.5×50cm)脱盐后，再用Sephadex G-50凝胶柱进行分子筛层析黄鳝抗菌肽，层析柱规格为1.5×30cm，洗脱液为0.04mol几的磷酸盐缓冲液，pH7.2，线性流速为0.2ml／min，1ml／管收集。肝脏和肠道分别得到两个洗脱峰，峰之间区分非常明显，抑菌检验发现，分离的两种组织第二洗脱峰均对嗜水气单胞菌具有杀灭作用；对有抑菌活性的洗脱峰用Macro-Prep High S阳离子交换柱进行离子交换层析，层析柱规格为2.5×20cm，洗脱缓冲液为0.04mol／L的磷酸盐缓冲液进行梯度洗脱，线性流速1ml／min，1ml／管，分别得到一个洗脱峰。抑菌检验发现，通过Macro-Prep High S阳离子交换柱层析的两峰对嗜水气单胞菌、大肠杆菌、金黄色葡萄球菌均有杀灭作用，其中对嗜水气单胞菌的抑制效果最好，大肠杆菌次之。通过Macro-Prep High S阳离子交换柱层析得到的活性峰成分经过SDS-聚丙烯酞胺凝胶电泳，结果表明，电泳图谱均为单一条带，说明分离的黄鳝抗菌肽已经达到电泳纯，其分子量约为6500Da。试验三、黄鳝肠道抗菌肽抗菌谱的测定及相关性质研究研究显示，分离纯化的黄鳝肠道抗菌肽对G-细菌和G~+细菌均有不同程度的抑制或杀灭作用，但不同的微生物对其敏感性不同。其对致病性嗜水气单胞菌、大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、枯草杆菌的最小抑菌浓度分别为0.048ug／uL、0.195ug／uL、3.125ug／uL、12.5ug／uL、50ug／uL。黄鳝抗菌肽具有以下性质：(1)耐热性，将分离纯化到的黄鳝抗菌肽分别经100℃的沸水浴0min，10min，30min，60min，90min，120min后，观察到其对嗜水气单胞菌在沸水浴10min时仍具有极强的抗菌活性，沸水浴30min时其抗菌活性减弱抑菌圈较小；(2)耐冻融性，黄鳝抗菌肽在-80℃分别冻融冻融0、2、4、6、8、10次后，观察到在反复冻融8次的情况下还具有一定的杀菌能力，冻融10次后未出现明显的抑菌圈。