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本试验以桃和樱桃为材料,通过同源性分析设计定向引物,从基因组 DNA中定向克隆ACC氧化酶、合成酶基因。对PCR扩增的目的片段DNA用 1% 琼脂糖凝胶电泳检测后,进行回收、连接转化,通过蓝白筛选挑取白色菌落 提取质粒DNA进行酶切鉴定和质粒PCR鉴定,确定重组子后用双脱氧终止法 测定DNA全序列。试验筛选出适宜的ACC氧化酶和ACC合成酶基因克隆的 PCR反应体系、外源目的片段DNA连接反应体系和重组子酶切鉴定反应体 系。DNA测序结果显示,桃的 ACC氧化酶基因序列全长为 1313bP,樱桃的 ACC氧化酶基因序列全长为 1310bp,它们均由 2个外显子和 3个内含子构成, 外显子总长为 1000bp。同源性分析可知,桃与杏的 ACC氧化酶基因 mRNA序 列、编码的氨基酸序列同源性分别达到94.1%和96.7%,而樱桃与桃的ACC 氧化酶基因DNA序列同源性达97.8%。另外,桃的ACC合成酶基因序列全长 为 1416bp,与李子的 ACC合成酶基因 mRNA序列同源性达 71.2%。