【摘 要】
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目的:采用血清药理学方法,研究玄丹散结汤对子宫腺肌症在位内膜间质细胞迁移、侵袭能力及间质上皮转化（Mesenchymal-epithelial transition,MET）样表型变化的影响,并初步探讨玄丹散结汤治疗子宫腺肌症的具体分子机制,为临床治疗子宫腺肌症提供实验论证和理论基础。方法:1.给SD雌性大鼠灌胃,采血制备玄丹散结汤含药血清、孕三烯酮含药血清及空白对照血清,分装保存备用。2.收集子
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目的:采用血清药理学方法,研究玄丹散结汤对子宫腺肌症在位内膜间质细胞迁移、侵袭能力及间质上皮转化（Mesenchymal-epithelial transition,MET）样表型变化的影响,并初步探讨玄丹散结汤治疗子宫腺肌症的具体分子机制,为临床治疗子宫腺肌症提供实验论证和理论基础。方法:1.给SD雌性大鼠灌胃,采血制备玄丹散结汤含药血清、孕三烯酮含药血清及空白对照血清,分装保存备用。2.收集子宫腺肌症患者的在位子宫内膜,体外分离培养腺肌症在位内膜间质细胞。3.Transwell细胞迁移和侵袭实验检测玄丹散结汤含药血清对腺肌症在位内膜间质细胞迁移、侵袭能力的影响,筛选出玄丹散结汤含药血清优效抑制浓度,并以此浓度进行后续实验。4.显微镜下观察玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,细胞MET样表型变化情况。5.qRT-PCR法检测玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,迁移侵袭基因 AQP5、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9 等 mRNA 的表达情况。6.Western Blot法检测玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,AQP5、AKT、p-AKT、ERK、p-ERK、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9的蛋白表达情况。结果:1.本实验成功制备出玄丹散结汤含药血清、孕三烯酮含药血清和空白对照血清,保存于-80℃冰箱待用。2.本实验成功体外分离培养出腺肌症在位内膜间质细胞（Eutopic endometrial stromal cells,EuESCs）并传代成功,可进行后续相关实验。3.与空白对照血清相比,孕三烯酮含药血清和2.5%、5%、10%浓度玄丹散结汤含药血清均可以抑制腺肌症在位内膜间质细胞的迁移侵袭能力,差异有统计学意义（P＜0.01）,其中玄丹散结汤含药血清抑制能力呈一定浓度依赖性,10%浓度玄丹散结汤含药血清抑制能力最强,穿过Transwell小室发生迁移、侵袭的细胞数最少（P=0.0002）。10%浓度玄丹散结汤含药血清抑制能力强于孕三烯酮含药血清,差异有统计学意义（P＜0.05）。4.显微镜下观察显示玄丹散结汤含药血清作用于腺肌症在位内膜间质细胞后,间质细胞形态转化为上皮细胞,部分细胞逐渐皱缩、变圆、漂浮,由扁平的长梭形转化为不规则椭圆形,细胞密度减少,稀疏分布,呈漩涡状排列。5.qRT-PCR法显示,与空白对照血清相比,玄丹散结汤含药血清对腺肌症在位内膜间质细胞中 AQP5、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9 在 mRNA 水平具有抑制作用（P＜0.05）,对E-cadherin、TIMP1、TIMP2在mRNA水平具有促进作用（P＜0.05）。6.Western Blot法显示,与空白对照血清相比,玄丹散结汤含药血清对腺肌症在位内膜间质细胞中 AQP5、p-AKT、p-ERK、N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9蛋白的表达有抑制作用（P＜0.05）,对E-cadherin蛋白的表达有明显促进作用（P＜0.01）,对AKT和ERK蛋白表达的差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1.玄丹散结汤可抑制腺肌症在位内膜间质细胞的迁移侵袭能力,且抑制能力在一定范围内呈浓度依赖性。2.玄丹散结汤可改变腺肌症在位内膜间质细胞形态,使其向上皮细胞转化,发生MET样表型变化,可能逆转了上皮间质转化（Epithelial-mesenchymal transition,EMT）过程。3.玄丹散结汤可能靶向下调AQP5,通过抑制PI3K/AKT和ERK通路活化,发生MET 样表型变化,降低 N-cadherin、Vimentin、MMP2、MMP9mRNA 和蛋白的表达,上调E-cadherinmRNA和蛋白的表达,抑制腺肌症在位内膜间质细胞迁移侵袭能力从而发挥治疗作用。
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