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目的:通过体外培养人牙髓干细胞(human dental pulp stem cells, hDPSCs),观察腺病毒rAd-EGF转染至hDPSCs后对其生长、增殖和凋亡的影响,为EGF对hDPSCs的作用提供实验依据,并为牙齿缺损与牙再生提供可能的新思路和新方法。 方法:1.常规收集对数生长期的hDPSCs,将密度为1×105/ml的细胞悬液接种至6孔板中,每孔细胞悬液量为2ml,根据实验目的分为空白组(只有hDPSCs和培养基)、阴性对照组(转染腺病毒rAd-EGFP的hDPSCs)和实验组(转染腺病毒rAd-EGF的hDPSCs),待24h细胞贴壁后转染腺病毒rAd-EGFP与rAd-EGF,在72h后采用RT-PCR检测腺病毒rAd-EGF转染hDPSCs后对 EGF mRNA表达的影响情况。2.体外培养hDPSCs,常规收集对数生长期的hDPSCs,将密度为4×103/ml的细胞悬液接种于96孔板中,每孔细胞悬液量为200μl,根据实验目的分为空白组、阴性对照组和实验组。待24h细胞贴壁后转染腺病毒rAd-EGFP与rAd-EGF,在1、3、5、7、9、11d的同一时点,采用MTT比色法观察腺病毒rAd-EGF转染 hDPSCs后对其体外增殖能力的影响。3.常规收集对数生长期的hDPSCs,将密度为3×106/ml的细胞悬液接种于6孔板中,每孔细胞贴壁后转染腺病毒rAd-EGFP与rAd-EGF,继续培养48h,用流式细胞仪Annexin V-FITC/PI法检测腺病毒rAd-EGF转染hDPSCs后的凋亡情况。 结果:实验组hDPSCs中EGF mRNA的表达水平相对于阴性对照组与空白组均明显上调(P<0.05)。与阴性对照组与空白组比较,实验组hDPSCs体外增殖能力明显升高,第1-7天升高明显,有显著性差异(P<0.05),但7天后减弱,无显著性差异(P>0.05)。流式细胞Annexin V-FITC/PI法结果显示在作用时间相同的情况下同阴性对照组与空白组相比,实验组hDPSCs体外凋亡指数明显降低(P<0.05)。 结论:腺病毒rAd-EGF转染入hDPSCs, EGF mRNA的表达量增加,在短期内对其增殖能力具有促进作用,对其凋亡具有抑制作用。