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本论文第一章基于毛细管电泳—Ru(bpy)<,3><2+>电化学发光(CE-ECL)对酶催化反应产物脯氨酸的检测建立了脯氨酸肽酶(PLD，EC3.4.13.9)活性测定的新方法。在最佳测定条件下(pH 7.5，30 mmol/L磷酸盐缓冲溶液，5.0 mmol/Lru(bpy)<,3><2+>，工作电极电位1.3V，进样：10 kV，10s)脯氨酸的检测限为l2.2fmol(S/N=3)，相当于1.22x10<-8>UPLD催化lmin产生脯氨酸的量。实验对影响酶反应的因素如预孵育、底物和辅因子的浓度、体系的pH及反应时间进行了优化。PLD的优化的反应条件为：(1)预孵育：缓冲溶液为3.0×10<-3>mol/L(pH 7.6)磷酸盐缓冲溶液5倍稀释的血浆在1.0×10<-3>mol/LMn<3+>存在时预孵育24小时。 (2)孵育：Mn<2+>浓度为1.0×10<-3>mol/L；甘氨酰脯氨酸浓度为O.0l moI/L：37℃孵育30 min。(3)终止反应：体系于80℃的水浴中加热10 min。在最佳反应及检测条件下，方法的相对标准偏差(RSD)为3.47％(n=10)，回收率在97.0[％]与106％之间；4个血浆样本和2个血清样本分别用CE-ECL法和Chinard法进行检测，所得结果基本一致。我们将此方法用于糖尿病患者PLD活性的研究。45例样本的平均值为888.18U/L，标准偏差为211.48U/L，45个样本服从正态分布。在无高甘油三酯症的38例样品中，PLD活性与血糖值呈显著正相关(r=O.495，p<0.002)。伴随有高甘油三酯症及无高甘油三酯症的糖尿病血清PLD活性均显著高于血糖正常组(p
为7.78μM。 Km随维生素H浓度升高而降低，而Km/Vmax的值基本不变，说明维生素H对PLD的抑制为反竞争性抑制。而扑热息痛对脯氨酸肽酶的抑制为非竞争性抑制，扑热息痛对脯氨酸肽酶的抑制常数为9.73 x 10<3>μg/mL。