自然衰老小鼠T淋巴细胞亚群变化及干细胞治疗效果观察

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目的:了解自然衰老小鼠T淋巴细胞亚群比例及增殖能力的变化,通过对年老组小鼠进行干细胞移植治疗,观察分析免疫功能指标改善情况,探索用干细胞治疗来提高免疫功能、延缓衰老的可行性。  方法:以自然衰老C57BL/6小鼠为研究对象,分别检测和分析比较2月龄、7月龄和21月龄小鼠外周血中,T淋巴细胞亚群百分比、脾脏T淋巴细胞增殖能力变化情况;给21月龄小鼠,通过尾静脉注射胎鼠间充质干细胞,观察其对衰老小鼠外周血T淋巴细胞亚群及其脾脏T淋巴细胞增殖能力的影响。C57BL/6小鼠外周血T淋巴细胞亚群百分比检测,采用流式细胞仪检测不同年龄组小鼠(Ⅰ组:2月龄;Ⅱ组:7月龄;Ⅲ组:21月龄)外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞占CD3+T淋巴细胞的比例,CD8+CD28+、初始性及记忆性CD4+、CD8+T淋巴细胞占各自亚群的比例。脾脏T淋巴细胞增殖能力检测,以ConA刺激CFSE标记的脾脏T淋巴细胞,用流式细胞仪检测记录刺激组和未刺激组荧光强度变化,通过ModFit软件分析获得增殖指数。从怀孕13.5天的雌鼠获得胎鼠,分离、培养干细胞,流式细胞仪鉴定表型,成脂、成骨诱导分化试剂诱导分化后染色鉴定分化能力。给予衰老小鼠干细胞治疗,治疗组给予1×106个细胞,每周一次,注射三次,一个月后,检测治疗组小鼠外周血中T淋巴细胞亚群比例及其脾脏T淋巴细胞增殖能力。  结果:  1.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组小鼠外周血中CD4+T淋巴细胞比例分别为64.08%、49.71%和47.22%,CD8+T淋巴细胞比例分别为33.18%、46.00%和51.10%。和Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组小鼠CD4+T淋巴细胞百分比降低,CD8+T淋巴细胞百分比升高,差异有统计学意义(P<0.05);而Ⅱ组和Ⅲ组相比,两个指标的差异无统计学意义(P>0.05)。  2.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组小鼠外周血中初始性CD4+T淋巴细胞比例分别为21.68%、7.44%和10.73%,记忆性CD4+T淋巴细胞比例分别为8.73%、17.35%和37.47%,初始性CD8+T淋巴细胞比例分别为43.83%、27.36%和13.92%,记忆性CD8+T淋巴细胞比例分别为:9.10%、11.31%和32.10%。和Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组小鼠初始性CD4+和CD8+T比例均显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);Ⅲ组小鼠外周血中记忆性CD4+和CD8+T淋巴细胞比例上升差异有统计学意义(P<0.05)。和Ⅱ组相比,Ⅲ组小鼠外周血中初始性CD8+T淋巴细胞比例显著下降,差异有统计学意义(P<0.05);记忆性CD4+和CD8+T淋巴细胞比例显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。  3.Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ组小鼠外周血中CD8+CD28+T淋巴细胞在其亚群比例分别为24.38%、31.64%和47.67%。和Ⅰ组、和Ⅱ组相比,Ⅲ组小鼠外周血中CD8+CD28+T所占比例显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。  4.脾脏T淋巴细胞刺激增殖指数,和Ⅰ组相比,Ⅱ组和Ⅲ组小鼠的T淋巴细胞增殖能力显著下降,差异有统计学意义差异有统计学意义(P<0.05);Ⅱ组和Ⅲ组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。  5.胎鼠干细胞CD29表达为99.9%,CD44表达为90.3%,SCA-1表达为85%,CD34表达为2.9%,CD45表达为0.5%,CD11b表达为0.5%。细胞可以被诱导分化为骨、脂肪细胞。  6.治疗组21月龄小鼠外周血中CD4+、CD8+T淋巴细胞分别为53.12%、46.36%,初始性和记忆CD4+T淋巴细胞分别为5.84%和53.94%,初始性和记忆CD8+T淋巴细胞分别为14.98%和32.48%,CD8+CD28+T淋巴细胞百分比为42.28%。和对照组21月龄小鼠相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。  7.治疗组21月龄T细胞刺激增殖指数和对照组21月龄小鼠相比,呈现下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:  1.C57BL/6小鼠外周血中CD4+、初始性CD8+、初始性CD8+T淋巴细胞比例呈增龄性下降,记忆性CD4+、记忆性CD8+T淋巴细胞比例呈增龄性升高,T淋巴细胞刺激增殖能力呈增龄性下降。这些指标可以作为C57BL/6小鼠免疫功能衰退的标记物。  2.分离培养所得的细胞为胎鼠源间充质干细胞。  3.给予19月龄C57BL/6小鼠干细胞治疗,其T淋巴细胞相关指标未能得到改善,表明干细胞抗免疫衰老无明显效果。
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