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本论文在前期研究的基础上,从宁夏枸杞“宁杞1号”各个时期的混合花药中克隆了 3个14-3-3蛋白家族基因的cDNA,分别命名为Lb14-3-3a、Lb14-3-3b和Lb14-3-3c,并对这3个基因进行了生物信息学分析,时空表达、遗传转化和分子功能初步分析,具体研究结果如下:(1)采用RT-PCR技术,从“宁杞1号”花药中克隆了Lb14-3-3a、Lb14-3-3b和Lb14-3-3c基因的ORF,Lb14-3-3a基因的ORF长为768 bp,可编码255个氨基酸,分子量为61.9 kD,等电点为4.99;Lb14-3-3b基因的ORF长为747 bp,可编码248个氨基酸,分子量为63.09 kD,等电点为4.62;Lb14-3-3c基因OF长为777 bp,可编码258个氨基酸,分子量为64.14kD,等电点为4.95,它们都属于14-3-3蛋白超基因家族,且这3个蛋白质的二级结构主要由α-螺旋构成。(2)qRT-PCR分析表明,这三个枸杞花药蛋白家族基因在枸杞的不同组织、器官、不同花药发育时期都有表达,Lb14-3-3a基因在果实和花中优势表达,而在根茎叶中表达量相对较低,且在花药发育早期表达量相对较低,造孢细胞时期开始增加,到小孢子母细胞时期达到峰值,四分体时期开始下降,成熟花粉粒时期表达量最低;Lb14-3-3b基因在枸杞的花与果实中表达量较高,根、茎、叶中表达量较低,花药发育早期表达量相对较低,四分体时期开始增加,到二核花粉时期达到峰值;Lb14-3-3c基因在雄蕊中的表达量最高,在根、茎、叶,青果、红果、雌蕊、花瓣和花萼中的表达均较低,在小孢子母细胞时期表达量最高,成熟花粉粒时期表达量最低,推测该蛋白家族基因参与枸杞花器官生长发育的调控。(3)构建了植物过表达载体Lb14-3-3b-pC1305.1-35S和Lb14-3-3c-pC1305.1-35S。采用农杆菌介导途径将实验室前期构建的植物过表达载体pMDC83-Lb14-3-3a和Lb14-3-3b-pC1305.1-35S转入“三生烟”烟草中,结果表明,获得了 6株转Lb14-3-3a基因烟草植株,阳性转化率为54.5%,转Lb14-3-3烟草植株生长速度较快,有4株花器官出现畸变,出现喇叭型对称的6片花瓣,且柱头高于雄蕊,这与枸杞雄性不育突变体“宁杞5号”柱头和花药特征相一致;并获得9株阳性转Lb14-3-3b基因烟草植株,阳性转化率为75%,转基因烟草植株生长缓慢,有5株花器官出现畸变,出现花瓣缺失现象,有4片花瓣致使整个花型成四角型,缺少1个花丝,花药发育不完全,致使烟草植株难以完成正常的有性生殖,推测枸杞Lb14-3-3a和Lb14-3-3b基因可能影响了烟草植株的生长发育,在花粉的的败育过程中起着一定的调控作用。研究结果为深入探讨Lb14-3-3蛋白家族基因对枸杞花器官及枸杞植株生长发育的调控作用提供了理论参考,同时也为拓展Lb14-3-3蛋白在植物生长发育中的调控机制和分子机理提供了新思路。