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目的本研究采用免疫组织化学法检测Survivin、Bcl-2在儿童骨肉瘤组织中的表达情况,采用DNA末端原位标记法( TUNEL法)检测儿童骨肉瘤组织中的细胞凋亡,探讨上述基因与细胞凋亡的相关性及在儿童骨肉瘤发生发展中的作用及临床意义。材料与方法本研究标本选取1998年1月~2008年3月泰山医学院附属医院、泰安市妇幼保健院及复旦大学附属儿科医院收治并确诊的儿童骨肉瘤病例41例,均石蜡病理确诊,将接受规范治疗的患儿(包括手术及术前术后的化疗)纳入本组研究范围,共计36例,31例患儿获术后门诊或电话随访,目前能确认其生存状态,5例失访。失访患儿在生存分析中以其最后随访时间视为死亡日期。其中男17例,女19例;年龄4~12岁,中位数年龄8.5岁;存活时间6月~113月;发病部位股骨24例,胫骨7例,肱骨3例,腓骨2例;瘤体最大直径≤5cm者14例,>5cm者22例;组织病理学分型:骨母细胞型13例,软骨母细胞型12例,纤维母细胞型7例,其它4例;肿瘤Enneking分期:ⅠA期1例,ⅠB期1例,ⅡA期9例,ⅡB期13例,Ⅲ期12例。其中所有石蜡标本采用病理切片号随机切片,实验后盲法分析。以同期骨软骨瘤标本20例作为对照组。应用免疫组织化学法对36例儿童骨肉瘤组织,20例骨软骨瘤组织中Survivin及Bcl-2的表达水平进行检测。探讨儿童骨肉瘤中Survivin与Bcl-2表达的相互关系,单因素分析其与本组患儿的性别、年龄、原发肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型、Enneking分期及Survivin与Bcl-2表达的相关性。.采用DNA末端原位标记法( TUNEL法)检测儿童骨肉瘤及软骨瘤组织中的细胞凋亡,计算凋亡指数(AI)后分析与Survivin及Bcl-2表达的相关性,并对其临床意义进行初步探讨。所有资料均用SPSS13.0统计软件包进行处理,具体统计方法包括:卡方检验,两独立样本秩检验( Mann-Whitney Test ),多独立样本秩检验(Kruskal-Wallis Test),Spearman相关性分析,用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,COX模型回归分析,统计分析检验水准为α=0.05。结果1.Survivin表达: 36例儿童骨肉瘤组织中Survivin表达阳性率为69.4%(25/36),对照组20例骨软骨瘤中表达均为阴性(P〈0.05);Survivin阳性表达与骨肉瘤的Enneking分期相关,与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型无明显关系。Enneking分期Ⅰ~Ⅱ与Ⅲ期之间,表达率差异明显,EnnekingⅠ~Ⅱ期阳性率为43.4%(10/23),Ⅲ期阳性率为83.3%(10/12), (P〈0.05),提示Survivin的阳性表达与Enneking分期有关。2. Bcl-2表达:36例儿童骨肉瘤组织中Bcl-2表达阳性率为47.2%(17/36),对照组20例骨软骨瘤组织中未见表达(P〈0.05) ; Bcl-2阳性表达与与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型无明显相关,与Enneking外科分期及相关,EnnekingⅠ~Ⅱ期阳性率为30%(6/20),Ⅲ期阳性率为62.5%(10/16),差异有统计学意义(P值<0.05)。说明分期越高,Bcl-2表达越显著。。3. Bcl-2的阳性表达者中Survivin阳性表达率为88.2%(15/17),阴性表达者中Bcl-2阳性表达率为15.7%(3/19),,两者差异统计学意义(P<0.05),等级相关分析显示,儿童骨肉瘤组织中Survivin与Bcl-2表达呈正相关(P<0.05)。4. AI范围3.6%～16.4 % ,均值7. 3 % ,经检验AI在儿童骨肉瘤组性组为(6.66±1.87)%,对照组组为(12.28±3.29) %,两组间差异有统计学意义(P < 0. 05);说明骨肉瘤中的细胞凋亡减少。AI在Survivin阳性组为(4.55±0.63)%,阴性组为(6.48±1.47) %,两组间差异有统计学意义(P < 0. 05);Survivin的表达与AI呈负相关。AI在Bcl-2阳性组为(4.68±0.57) %和阴性组(6.53±1.65) %两组间差异有显著性(P < 0. 05)。Bcl-2的表达与AI呈负相关。采用Kaplan-Meier法绘制Survivin及Bcl-2阳性组和阴性组生存曲线,,提示Survivin及Bcl-2阳性组生存期显著低于阴性表达者。Cox回归模型进行多因素生存分析显示,骨肉瘤的Enneking分期,Survivin和Bcl-2的表达水平是儿童骨肉瘤预后相关的独立的重要因素。结论1.Survivin在儿童骨肉瘤细胞中具有较高的表达率。Survivin在骨肉瘤的表达与Enneking分期相关,与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型无明显相关。Survivin的阳性表达缩短骨肉瘤患儿的生存时间。2. Bcl-2在儿童骨肉瘤中阳性表达与性别、年龄、肿瘤部位、肿瘤直径、病理分型无明显相关,与Enneking分期相关。Survivin表达与Bcl-2表达呈正相关。Bcl-2的阳性表达缩短骨肉瘤患儿的生存时间。3. Survivin及Bcl-2的表达均与AI呈负相关。说明Survivin、Bcl-2蛋白可能阻碍了儿童骨肉瘤细胞的凋亡,促进了肿瘤的分裂增殖。4.多因素分析显示,骨肉瘤Enneking外科分期、Survivin及Bcl-2的表达为骨肉瘤重要的预后因素。综合分析以上指标对判断儿童骨肉瘤预后有重要的参考价值。