背景与目的Angiopoietin-like protein 1称为血管生成素样蛋白-1,是血管生成素样蛋白家族成员之一,参与多种生物学过程,如血管生成、造血干细胞扩增、脂质代谢和炎症,且在各种癌症的进展中发挥重要作用,如肝细胞癌、恶性黑素瘤、肺癌、结直肠癌等。Myoferlin是铁蛋白家族成员蛋白之一,主要以其在成肌细胞融合中的功能以及成肌细胞和内皮细胞的内吞作用而闻名。Myoferlin在许多恶性肿瘤(乳腺癌,B细胞淋巴瘤,胰腺癌和肺癌)中被发现显着过度表达,而在大多数正常组织中不存在。已有研究表明,Myoferlin与胞内脂筏微区有关,并参与维持细胞膜穴样内陷结构。Paxillin又称桩蛋白,是黏着斑的主要成分,被认为与癌细胞运动、迁移和侵袭有关,并最终与肿瘤转移有一定相关性,已有研究表明Paxillin功能突变与许多肿瘤(包括乳腺癌、肺癌、前列腺癌、黑色素瘤和结肠癌)的恶行进展相关。本实验通过免疫组织化学染色方法检测胸腺上皮肿瘤中Angiopoietin-like protein 1、Myoferlin和Paxillin的表达,结合患者临床病理参数,探讨三者在肿瘤诊断、侵袭、转移及预后方面的作用。方法收集青岛大学附属医院胸外科2008-2014年间经手术切除的120例胸腺上皮肿瘤标本和20例正常胸腺组织标本作为研究对象,所有患者术前无高血压、糖尿病等慢性疾病及其他器官肿瘤,且患者术后无其他器官原发性肿瘤。收集所有患者的临床病理资料及随访数据,其中失访10人。经2名高年资病理科医师根据WHO(2015)胸腺上皮肿瘤病理分型对肿瘤组织标本进行病理类型确认,根据第8版胸腺肿瘤TNM分期确定患者临床分期。通过免疫组织化学染色(Envision plus二步法)检测胸腺上皮肿瘤组织中Angiopoietin-like protein 1、Myoferlin及Paxillin的表达,以正常胸腺组织为阴性对照;阳性着色强度判定标准采用视野积分法。使用易侕统计(www.empowerstats.com)和R语言编程软件来对实验数据进行处理与分析,统计方法包含回归分析及logistic多元回归分析,使用Kaplan-Meier法绘制生存曲线,并使用Log-rank检验来评估生存曲线之间的差异,以a=0.05作为检验标准。结果(1)ANGPTL 1高表达组与低表达组相比,患者年龄更大(56.9±13.5岁,P<0.001),术后存活时间更短(32.4±20.5月,P<0.001),但与肿瘤大小无明显相关性(P=0.861,0.612)(2)年龄不小于65周岁的胸腺肿瘤患者与小于65周岁的患者相比,术后死亡率增加6.3倍(OR=7.3,95%置信区间:2.0-27.1,P=0.003)。(3)肿瘤直径超过6cm的患者与小于6cm患者相比,术后生存时间增加12.7个月(b=12.7,95%置信区间:6.2-19.2,P<0.001)。(4)病理分型高度恶性组患者与正常胸腺患者相比,术后生存时间降低10.4个月[b=-10.4,95%置信区间:(-20.4)-(-0.4),P=0.044](5)临床分期晚期患者与早中期患者相比,术后死亡率增加7.7倍(OR=8.7,95%置信区间:2.3-32.9,P=0.001),晚期患者与胸腺囊肿患者相比,术后生存时间降低16个月[b=-16,95%置信区间:(-28.2)-(-3.8),P=0.011](6)ANGPTL 1高度表达患者与低度表达患者相比,术后死亡率增加4.7倍(OR=5.7,95%置信区间:1.3-24.5,P=0.020),术后存活时间降低25.2个月[b=-25.2,95%置信区间:(-32.5)-(17.8),P<0.001](7)经年龄、性别、肿瘤直径大小、病理类型调整后,ANGPTL 1高表达仍增加患者术后死亡风险,增加11.1倍,差异有统计学意义(HR=12.1,95%置信区间:1.5-94.3,P=0.018);经年龄、性别、肿瘤直径大小、病理类型及临床分期调整后,术后死亡风险仍呈增加趋势,但差异无统计学意义(HR=4.7,95%置信区间:0.5-41.9,P=0.167)。表明临床分期对ANGPTL 1高表达导致的结局干扰较大,但ANGPTL 1仍是术后死亡率的危险因素。(8)经年龄、性别、肿瘤直径大小、病理类型及临床分期调整后,ANGPTL1高表达仍降低患者术后存活时间,差异具有统计学意义[b=-26.6,95%置信区间:(-35.2)-(18.1),P<0.001;b=-26.6,95%置信区间:(-35.4)-(17.8),P<0.001],表明年龄、性别、肿瘤直径大小、病理类型及临床分期对ANGPTL 1高表达导致的结局干扰较小,ANGPTL 1高表达是术后存活时间的独立危险因素。(9)Myoferlin的表达水平与年龄、性别、肿瘤直径大小、是否伴有重症肌无力、生存预后及术后存活时间均无明显相关性,差异无统计学意义(P>0.05)(10)病理类型低度恶性组与高度恶性组相比,Myoferlin的表达水平无明显差异(P=0.927);患有胸腺上皮肿瘤患者与胸腺囊肿患者相比,Myoferlin的表达差异有统计学意义(P=0.011)。(11)临床早中期与临床晚期患者相比,Myoferlin表达水平无明显差异(P=0.530);患有胸腺上皮肿瘤患者与胸腺囊肿患者相比,Myoferlin的表达水平差异有统计学意义(P=0.007)。(12)Myoferlin的表达水平与患者生存预后无明显相关性,差异无统计学意义(P=0.598);与患者术后存活时间无明显相关性,差异无统计学意义(P=0.264)。(13)由免疫组织化学染色结果可以看出,Paxillin阳性表达只出现于胸腺癌组织中,20例胸腺癌患者的组织标本均呈低度水平表达;而其他病理类型胸腺肿瘤组织标本均为阴性表达,未见明显阳性着色。(14)由K-M生存曲线可以看出,ANGPTL 1高度表达时,患者同时期的术后存活率较低度表达时明显降低(P<0.0001);Myoferlin高度表达与低度表达相比,患者同时期的术后存活率无明显差异(P=0.74);病理分型低度恶性组与高度恶性组相比,患者同时期的术后存活率无明显差异(P=0.31);临床分期晚期组与早中期组相比,患者同时期的术后存活率明显降低(P=0.00024)。结论年龄、病理类型及临床分期对胸腺上皮肿瘤而言仍是重要预后参考指标,年龄越高、病理类型恶性程度越高、临床分期越晚,患者术后死亡率越高,术后生存时间越短。ANGPTL 1高表达提示胸腺上皮肿瘤患者不良预后结局,可能与胸腺上皮肿瘤的惰性特征和侵袭、转移特性相关。Myoferlin在胸腺上皮肿瘤中持续低度表达,与年龄、病理类型、临床分期无明显相关,可能参与调节胸腺肿瘤膜修复与磷脂代谢过程,在肿瘤早期侵袭、转移过程中发挥重要作用。Paxillin特异性表达于胸腺癌组织中,可作为胸腺癌的特异性诊断因子应用于临床。本实验研究为胸腺上皮肿瘤在诊断、转移及预后方面提供相应的理论参考,帮助我们进一步理解肿瘤不良预后的相关因素及机制。限于该病的低发病率,我们仍需要大样本、多中心的协作研究以提供更可靠的临床循证学证据,以实现早期诊断、早期治疗,不断提高肿瘤患者的治疗效果、生活质量和生存预后,从而达到最终的治愈目标。