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该研究完成了以下工作:1.HSV-ⅡgDDNA疫苗的构建:根据GenBank中HSV-ⅡHG52株gD基因序列设计了一对引物,采用PCR方法扩增出HSV-Ⅱ Sav株gD全部编码区的基因片段,经中介pUCm-T载体,将其插入到真核表达质粒pcDNA3中相应的位点,并转化E.coliDH5 α,构建出HSV-ⅡgD DNA疫苗.通过PCR、酶切和测序鉴定,证明gD基因片段在pcDNA3中插入正确,并将构建出的重组质粒命名为Pg.经原位ELISA法证实,Pg在COS-7细胞中瞬时表达的蛋白能够与gD单克隆抗体结合,这表明所构建的Pg DNA疫苗能够在哺乳动物细胞中表达.2.小鼠趋化因子MIP-1 α重组真核表达质粒的构建:首先用细菌脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞,提取总RNA,然后应用RT-PCR方法,扩增出MIP-1 α基因的全部编码序列.经中介pUCm-T载体和HindⅢ、XbaⅠ双酶切处理后,将其插入到用相同酶切的真核表达质粒pcDNA3中,并转化E.coli DH5 α.通过PCR、酶切和测序鉴定,证明MIP-1 α基因片段在pcDNA3中插入正确,并将构建出的重组质粒命名为Pm.经RT-PCR和Boyden趋化小室法鉴定,证实了所构建的Pm在哺乳动物细胞中能够表达具有生物学活性的MIP-1 α.3.Pg+Pm DNA疫苗对小鼠的初步免疫观察:每次用200μg/200μl pcDNA3、Pg、Pg+Pm和等体积生理盐水(NS)肌肉注射免疫BALB/C小鼠,连续免疫3次,末次免疫后一个月用100LD50病毒量进行阴道内攻击.结果表明Pg+Pm疫苗组的存活率(86.7％)明显高于Pg疫苗组的(53.3％);通过阴道组织病理切片和半定量积分分析,证明了Pg+Pm疫苗比Pg疫苗明显降低了小鼠的发病率.为探讨Pg+Pm DNA疫苗诱导的免疫应答,于末次免疫后第二周及第四周收集小鼠血清和脾细胞,采用微量细胞中和试验和ELISA法检测血清特异性抗体,采用淋巴细胞转化试验检测脾T细胞增殖反应程度.结果显示Pg+Pm DNA疫苗没有比Pg DNA疫苗诱导出更高的特异性抗体,但脾T细胞增值反应程度明显高于Pg疫苗组的,表明Pg+Pm DNA疫苗诱导了更高的细胞免疫应答.综上所述,该研究以HSV-ⅡgD和MIP-1 α成功构建了预防HSV-Ⅱ感染的DNA疫苗.动物初步免疫发现,gD加MIP-1 α的DNA疫苗免疫效应优于单独的gD DNA疫苗,可以显著地提高小鼠的保护率和降低发病率.提示以MIP-1α作为分子佐剂的HSV-Ⅱ DNA疫苗具有潜在的应用价值.