淋巴瘤血管内皮细胞特异性表面标记的研究

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第一部分淋巴瘤血管内皮细胞特异性表面标记实验方法的建立[目的]联合应用激光显微切割(LCM)技术及基因芯片(cDNA microarray)技术研究淋巴瘤血管内皮细胞特异性表面标记。[方法]选择锌固定液固定新鲜淋巴结组织,进行CD34快速免疫组化染色标出血管内皮细胞,激光显微切割血管内皮细胞并提取细胞总RNA进行体外两轮线性扩增后进行cDNA microarray。[结果]1、锌固定剂可以有效保存组织RNA并不影响快速免疫组化染色。2、可在半小时内成功进行CD34快速免疫组化染色。3、LCM切割获得的3000血管内皮细胞可以提取纳克级总RNA。4、经过两轮体外线性扩增,可以获得足够数量RNA送检cDNA microarray。[结论]LCM和cDNA microarray技术可以联合应用于研究淋巴瘤血管内皮细胞特异性表面标记。第二部分验证实验[目的]对淋巴瘤血管内皮细胞特异性表面标记的实验方法进行验证。[方法]通过扩增VEC特异性标记CD34及B淋巴细胞标记B19检测LCM切割细胞的精确度;采用半定量PCR方法以扩增前后的RNA各1μl工作为模板检测RNA体外扩增的有无偏差性;应用配对散点图分析Microarry的可重复性;应用原位杂交技术对Microarry的结果进行验证。[结果]LCM切割细胞具有较高精确度,RNA体外扩增的无偏差性;Microarry的结果具有较高的可重复性且可信度。[结论]LCM联合基因芯片技术可有效用于淋巴瘤血管内皮细胞特异性表面标记的研究。
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