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第一部分:肝癌诱发模型的建立目的:建立HPPCn肝脏特异性过表达转基因小鼠模型和小鼠原发性肝癌短期诱发模型。方法:①HPPCn肝脏特异性过表达转基因小鼠模型的建立:利用ApaⅠ、MluⅠ酶将质粒pGEM-his-hppcn酶切获得的重组片段(含有白蛋白增强子、白蛋白启动子、his-hppcn、SV40片段)经过显微注射进入FVB小鼠受精卵原核中,将其植入假孕FVB小鼠的输卵管中,从10日鼠龄子代小鼠尾中提取基因组,再用精心设计的引物Primer3 : 5’-CAAATGGGAGACAAAGAG-3’, Primer4 :5’-AGATGCGTGAGGTTCG-3’对新生子代小鼠进行PCR鉴定。②建立小鼠原发性肝癌短期诱发模型:将C57BL/6♀,C57BL/6♂,C3H/Hen♂三种小鼠用腹腔注射的方式给大剂量的二乙基亚硝胺(DEN:C57BL/6♀,300mg/kg; C57BL/6♂,300mg/kg;C3H/Hen♂,200mg/kg)作为肝癌诱发启动剂,一周后再连续给3日二乙酰基芴(2-AAF:20mg/kg),然后将小鼠肝脏左叶从根部结扎并切除(34%肝脏切除),再连续3日2-AAF灌胃,3周后处死小鼠,把小鼠肝脏一部分提取蛋白和RNA,一部分用福尔马林固定,48h后送做切片,用放射免疫分析、免疫组化、免疫印迹、Q-PCR等方法对建模情况予以评价。结果:①经过多次的显微注射,多次反复PCR鉴定,获得三只不同批次的转基因阳性小鼠。②在用DEN进行肝癌诱发时,三种小鼠的给药剂量及存活率如下:C57BL/6♀,300mg/kg,64.7%; C57BL/6♂,300mg/kg,0;C3H/Hen♂,200mg/kg,41.2%。对存活的各组小鼠经过多种方法鉴定,我们发现同期建模的C57BL/6♀小鼠的各项肝癌相关参数均有明显变化,提示肝癌诱发成功。结论:①成功的建立HPPCn肝脏特异性过表达转基因小鼠模型。②成功建立了小鼠原发性肝癌短期诱导模型。第二部分:肝癌移植模型的建立及HPPCn功能初评目的:建立裸鼠皮下移植瘤模型和肝癌原位移植模型,并且验证HPPCn在肝癌发展中的作用。方法:①皮下移植瘤模型的建立:首先,采用G418筛选的方法建立了稳定干涉HPPCn的HepG2细胞系,用MTT、Transwell实验检测HPPCn干涉对肝癌细胞增殖及迁移能力的影响。然后取对数生长期的HepG2、HepG2-siNC、HepG2-siHPPCn细胞,按照2-4×10~6个/100μl/只,注射到裸鼠前肢腋下,30日后处死小鼠,将瘤、肝、肺用4%多聚甲醛固定以进行病理分析。②小鼠原位移植模型的建立:将对数生期HepG2细胞用无菌的PBS稀释至2-4×10~6个/100μl/只,对裸鼠进行前肢腋下注射,建立荷瘤小鼠模型,20日后,处死小鼠,无菌取瘤,去除坏死组织和非瘤组织后剪成4-6mm~3的瘤块尽快植入到健康裸鼠的左叶肝脏中,第30日处死小鼠,取肝脏,肺及肝内肿瘤用4%多聚甲醛固定,做病理分析。结果:①MTT,Transwell实验结果显示干涉肝癌细胞HepG2中HPPCn的表达抑制了其增殖和迁移能力,皮下成瘤实验结果显示肝癌细胞HepG2中HPPCn被干涉后其体内增殖能力被抑制。②成瘤率100%,部分肝脏有可疑的转移灶点。结论:①皮下成瘤实验建模成功,干涉肝癌细胞内HPPCn的表达可以抑制其迁移和增殖。②成功建立了肝癌原位移植模型。