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脂肪细胞分化是由分化转录因子调控的复杂过程。过氧化物酶体增殖物激活受体家族(peroxisome proliferator-activated receptors，PPARs)和CCAAT增强子结合蛋白家族(CCAAT/enhance binding proteins，C/EBPs)等转录因子在脂肪细胞的分化过程中发挥着重要的功能。为了探讨PPARγ和C/EBPa基因及其产物对肉鸡腹脂含量的影响，本研究采用主动免疫策略，制备了鸡PPARγ和C/EBPa的抗血清；通过PPARγ和C/EBPa重组蛋白主动免疫，观察其对肉鸡腹脂含量的影响。结果表明，通过主动免疫策略，获得了较高滴度的抗血清；PPARγ主动免疫能显著降低肉鸡腹脂含量。主要包括以下几部分研究内容：
1.PPARγ基因和C/EBPa基因原核、真核表达载体的构建根据鸡PPARγ基因和C/EBPa基因cDNA序列设计一对引物，采用RT-PCR的方法扩增鸡PPARγ基因和C/EBPa基因的cDNA片段并将其分别插入到原核表达载体pGEX-4T-1和真核表达载体pcDNA3中；构建了PPARγ基因和C/EBPa基因的原核和真核表达载体pGEX-4T-1/PPARγ、pcDNA3/PPARγ、pGEX-4T-1/C/EBPa、pcDNA3/C/EBPa。
2.PPARγ基因和C/EBPa基因抗血清的制备为进一步研究PPARγ基因和C/EBPα基因的功能，将构建好的重组质粒pcDNA3-PPARγ和pcDNA3-C/EBPα，免疫小鼠，ELISA和Western blot结果表明pcDNA3-PPARγ和pcDNA3-C/EBPα免疫小鼠产生了效价较高和特异性较强的抗体。本研究所构建的真核表达载体pcDNA3-PPAR γ和pcDNA3-C/EBPα为在细胞水平上研究鸡PPAR γ基因和C/EBPα基因超表达提供了有力的工具。
3.PPARγ和C/EBPa融合蛋白对肉鸡腹脂含量的影响利用IPTG诱导含有原核表达质粒pGEX-4T-1/PPARγ和pGEX-4T-1/C/EBPa的大肠杆菌BL21(DE3)菌株，表达GST-PPARγ和GST-C/EBPa融合蛋白，表达产物用Glutathione Sepharose 4B纯化，将纯化后的重组蛋白免疫肉仔鸡，检测其产生抗体情况及其对肉鸡腹脂含量的影响。结果显示融合蛋白GST-PPARγ在大肠杆菌胞内主要以包涵体的形式表达，分子量大约80 kDa；融合蛋白GST-C/EBPa在大肠杆菌胞内主要以可溶性蛋白形式表达，分子量大约62 kDa。主动免疫肉鸡，PPARγ、C/EBPa及混合组均产生较高滴度的抗体，且PPARγ组肉鸡腹脂含量显著低于对照组。本研究结果初步表明，PPARγ和C/EBPa在鸡脂肪的生长发育调控中起到一定作用，为进一步理解鸡脂肪的生长发育机理提供了线索。