小窝蛋白caveolin1在Lmna敲除小鼠、细胞中的表达及其机制的初步研究

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【目的】  1. 研究Lmna基因敲除对小窝蛋白caveolin1表达的影响。  2. 探究laminA/C与caveolin1是否存在直接或间接的联系。  3. 探索caveolin1对细胞增殖和衰老的影响。  【方法】  1. 利用Western blot、免疫组织化学技术检测caveolin1蛋白在野生型和Lmna敲除小鼠中的表达水平。  2. 在人胚胎肾(HEK293T)、HEK293、人视网膜色素上皮细胞(RPE)各型细胞中过表达或敲低Lmna的表达后,Western blot和RT-qPCR检测caveolin1蛋白和mRNA表达;在HEK293T、小鼠胚胎成纤维细胞(MEFs)中过表达或敲低Cav1基因表达,反过来再检测laminA/C蛋白表达。  3. 在HEK293T细胞上过表达或敲低CAV1基因,CCK-8检测细胞增殖情况;在MEF细胞上敲低Cav1表达后,western blot检测衰老相关蛋白P53、P21表达。  【结果】  1. Western blot结果显示,蛋白caveolin1在Lmna-/-小鼠大部分组织,如骨骼肌、皮肤、小肠、肺、心、脑组织中表达上调;免疫组织化学染色结果显示,caveolin1在Lmna敲除鼠的肾脏组织中表达上调。  2. 敲低LMNA导致HEK293T 、HEK293、RPE细胞caveolin1表达升高,这与组织结果图一致。  3. 在HEK293T细胞上过表达laminC后,caveolin1蛋白表达上调,而过表达laminA、CAV1后对彼此表达无显著影响;在MEF细胞中,干扰Cav1表达后, laminA/C蛋白表达下降。  4. CCK-8结果显示,敲低CAV1表达后,HEK293T细胞增殖能力增强,而过表达CAV1后,对HEK293T增殖能力无明显影响。  5. 在MEF细胞上干扰Cav1后,western blot显示衰老相关蛋白P53、P21 表达降低。  【结论】  Caveolin1在Lmna-/-小鼠或细胞中表达上调, caveolin1 的上调可能只是laminA/C敲除过程中的一个伴随现象,二者之间并无相互制约关系。Caveolin1表达量的敲低,相应的导致细胞增殖能力增强,衰老相关蛋白P53、P21表达降低。
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