核桃青皮次生物质的抑菌活性研究

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本文以核桃青皮为研究对象,就其次生代谢物质抑菌活性、提取工艺、活性成分分离纯化进行研究,并就其抑菌机理进行了初步探索。结果如下:(1)以34种植物病原真菌和5种细菌为供试菌,对核桃青皮乙醇提取物及其萃取相的抑菌效果进行研究。结果表明:核桃青皮乙醇提取物对供试病原真菌均有一定的抑制活性;在浓度为40 mg·mL-1时,乙酸乙酯萃取相抑菌效果最好,对番茄灰霉等3种病原真菌的抑制率均为100%,对枯草芽孢杆菌和金黄色葡萄球菌的抑菌圈直径达12.07mm和12.54mm;不同浓度乙酸乙酯相对相同病原菌的抑制效果差异显著,对番茄灰霉、棉花立枯、苹果炭疽、小麦纹枯和小麦赤霉5种病原菌的EC50分别为:7.2634、6.2191、9.0695、5.5912和10.3102 mg·mL-1。小麦白粉病盆栽试验表明,乙酸乙酯萃取相对小麦白粉病预防作用要优于治疗作用,分别为68.96%和71.42%。(2)对不同溶剂和方法核桃青皮提取物的抑菌活性进行测定,并以得率及提取物对棉花立枯病原菌和苹果炭疽病原菌的抑制率为考察指标,对影响提取物抑菌活性的各因素进行优化。结果表明:不同溶剂和方法提取物的抑菌活性不同。供试浓度为干样1 g·mL-1时,95%乙醇冷浸提取物抑菌效果最好。采用乙醇冷浸提取时,各因素对核桃青皮抑菌活性物质提取效果的影响顺序依次为:乙醇浓度>提取次数>提取时间>料液比,优化后的提取工艺为:以85%乙醇为溶剂提取5次,每次28h,料液比为1:05。(3)采用活性跟踪的手段对核桃青皮乙醇提取物乙酸乙酯相中抑菌活性成分进行分离和纯化。经多次层析分离和纯化得到油Ⅰ、化合物A和B。运用GC-MS对油Ⅰ成分进行分析,发现油Ⅰ主要成分为2,6,10,14-四甲基十六烷(9.12%)和D-阿洛糖(6.92%)。通过光谱分析(MS和NMR),确定化合物A、B的结构分别为8-二羟基-3,4-二氢萘-1-酮、β-谷甾醇。化合物A对棉花立枯病原菌和苹果炭疽病原菌均具有较好的毒力,其EC50分别为0.4589 mg·mL-1和0.4707 mg·mL-1。化合物B对棉花立枯病原菌的毒力大大超过对苹果炭疽病原菌的毒力,其EC50分别为0.6337 mg·mL-1、36.8933 mg·mL-1。(4)对化合物A抑菌机理进行研究发现,化合物A可以促使植物病原真菌菌丝簇生,菌丝折断甚至消解。化合物A作用24h后的大肠杆菌菌落形状不规则,边缘粗糙,粘连现象较为明显,运动速度减缓。此外,化合物A能有效的缩短大肠杆菌的生长周期。
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