腰果过敏蛋白组分分析及过敏性消减研究

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腰果及其制品具有丰富的营养价值,同时也是八大食物过敏原中树坚果中的主要过敏原。随着腰果营养价值的发现,腰果及相关加工食品越来越受到大众的喜爱,使得目前腰果过敏现象比其它坚果过敏现象更为严重。因此开展腰果过敏原的研究对保护其过敏人群的生命健康和提高过敏人群的生活水平有着重大意义,而且也可提高食物过敏原特异性的诊断水平,为我国食物过敏标注制度的实施提供理论数据。本论文主要对腰果过敏蛋白组分进行分析及过敏性进行消减研究,具体研究内容及结果如下:(1)经过分离纯化提取的蛋白溶液中腰果过敏原蛋白主要是Ana o 2与Ana o 3两个过敏原,其分子量分别是33 KD和17 KD左右。(2)利用质谱测试的数据与NCBI-Anacardium occidentale数据库进行对比得到了腰果过敏原氨基酸序列;通过生物信息软件DNAStar中的Protean预测出两个主要过敏原的二级结构,将其与圆二色谱测得的结果结合分析得到:β-转角和无规则卷曲在整个氨基酸序列中出现率较高的区域和亲水性、抗原性均>0及表面可及性>1的位置对应的序列,有较高的可能性形成构象表位。(3)噬菌体展示确定出主要表位为:Ana o 2:108-111、113-119、181-186、218-224;Ana o 3:10-24、13-27、39-49、66-70、101-106、107-114、114-122,将主要表位中含量高的精氨酸与谷氨酸确认为关键氨基酸;从主要表位的数量解析获知Ana o 3比Ana o 2更容易引起人体过敏反应。(4)脱敏效果最优方法为:微波与超声波均开协同处理240 s、微波功率为600w后121℃、0.1 MPa、20 min、按3000 u/g的酶底物比例添加木瓜蛋白酶与胰蛋白酶。(5)体外胃肠模拟实验表明:模拟胃液能快速消化过敏蛋白,20s后致敏性蛋白消失,而且胃的消化性比肠消化性高,在胃中无致敏性,在肠中存在致敏性;同时证明Ana o 3比Ana o 2致敏性强,不易脱除。也与实验分析Ana o 3比Ana o 2更容易引起过敏反应相互验证。
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