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目的:采用紫外分光光度法,建立测定茯苓多糖的方法。同时对全国不同产地茯苓进行指纹图谱研究,建立茯苓较全面的质量评价体系,用于较全面地控制茯苓的质量,指导其GAP种植,指导茯苓合理的利用以及中药新药研究,对贵州省中药材规范化种植基地建设与发展有良好的促进作用。
方法:采集全国37个不同产地茯苓药材(贵州省内15个,贵州省外22个以及茯苓皮4个)。茯苓的水溶性部分主要为茯苓多糖,采用稀碱冷浸12 h提取,苯酚-硫酸比色法,以紫外-可见分光光度计于488 nm对37个茯苓药材和4个茯苓皮药材的多糖成分进行含量测定。茯苓脂溶性部分的化学成分主要为三萜成分,从茯苓皮提取物的乙酸乙酯部分分离纯化,得到茯苓脂溶性成分的部分单体。并利用多种层析手段进行分离和纯化,通过理化方法及光谱分析确证各化合物的结构。茯苓脂溶性部分的指纹图谱,以甲醇加热回流提取30分钟,用高效液相色谱仪(HPLC)对37个不同产地的茯苓药材脂溶性成分进行检测,液相条件是柱温30 ℃,波长210 nm和242 nm,进样量10 mL,色谱柱为Agilent Technologies: Hypersil ODS PN: 7991618–584(250×4.6 mm),粒径:5 mm ,流动相为乙腈和水(含0.01% H3PO4),1 mL/min的流速梯度洗脱,对37个HPLC检测的色谱图进行指纹图谱研究,并用HPLC对4个产地茯苓皮脂溶性成分进行检测,与茯苓脂溶性成分色谱图进行比较研究。
结果:茯苓中茯苓多糖的含量区域性较强,湖南省茯苓相对于贵州、云南省茯苓多糖含量偏低。贵州、云南省不同县的茯苓多糖含量有一些差异。茯苓皮中的茯苓多糖含量明显比茯苓中的含量低。从茯苓皮的乙酸乙酯部分分离得到3个化合物,根据其波谱数据,鉴定了其中的2个化合物,分别是去氢土莫酸和齐墩果酸。根据指纹图谱相似性计算软件计算处理结果表明,全国37个不同产地中药茯苓的脂溶性成分的指纹图谱的相关系数均在0.9左右,4个产地茯苓皮指纹图谱的相关系数均在0.9以上。
结论:本论文从茯苓多糖成分、茯苓酯溶性化学成分和茯苓酯溶性成分指纹图谱对中药茯苓和茯苓皮进行系统全面的研究,为系统全面建立茯苓质量评价体系提供一定的指导意义。