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目的通过检测不同化疗药物作用后survivin及caspase-3, 8, 9的变化,探讨survivin在DNR诱导白血病细胞凋亡机制中的作用。方法不同浓度的柔红霉素(DNR)和长春新碱(VCR)(0.1 mg/L、1 mg/L、10 mg/L)分别作用于Molt-4细胞,在不同作用时间点进行:(1)MTT法检测细胞增殖抑制率;(2)流式细胞术(FCM)分析细胞凋亡率;(3)逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)检测survivin mRNA含量的变化;(4)免疫组化法检测survivin蛋白表达的变化;(5)免疫印迹(Western blot)检测caspase-3, 8, 9蛋白表达变化。同时,免疫组化法检测62例急性白血病患儿survivin蛋白表达、定位,分析survivin与P53的相关性,以及survivin与化疗药物敏感性的关系。结果第一部分:(1)MTT结果显示随着药物剂量加大和作用时间延长,细胞增殖抑制率降低,呈时间和剂量依赖性,且DNR作用较VCR明显(P<0.05)。(2)FCM分析显示在相同药物剂量和相同时间,DNR组较VCR组Molt-4细胞凋亡率明显升高(P<0.01)。(3)RT-PCR法检测发现在DNR组,随剂量加大和作用时间延长,survivin mRNA含量减低(P<0.05),而在VCR组没有明显变化(P>0.05)。(4)免疫组化法可见随药物剂量加大和作用时间延长,DNR组survivin蛋白表达减低(P<0.01),呈现从胞浆向胞核转移的现象,而在VCR组无明显变化(P>0.05)。(5)Western blot法观察到DNR组Molt-4细胞可检测到caspase-3酶原及活化片断的表达,同时检测到caspase-9酶原剪切活化片断的表达,呈时间和剂量依赖性(P<0.05),但无明显的caspase-8活化片断的表达。第二部分:(1)Survivin在急性白血病细胞中的表达较正常细胞高(P<0.05)。(2)急性白血病患儿survivin的表达与P53呈明显正相关(P<0.01)。(3)Survivin胞核表达的急性白血病患儿比胞浆表达者临床完全缓解率高(P<0.05)。结论(1)DNR通过线粒体途径诱导白血病细胞凋亡。(2)Survivin/P53在DNR诱导的细胞凋亡中发挥重要作用,而与VCR诱导的细胞凋亡无明显关系。(3)Survivn在儿童急性白血病中的高表达提示其在急性白血病(AL)的发生发展中起重要作用,survivin在胞核和胞浆的不同表达可作为判断预后的指标,抑癌基因P53的失活与survivin的表达在AL发生中起协同作用。