胍基修饰磁性材料对磷酸蛋白富集

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磷酸化修饰是蛋白翻译后修饰中最为重要的修饰之一,蛋白的磷酸化修饰几乎参与生命活动的每一个环节,包括酶活性调节、神经信号调节、细胞分裂增殖、癌症发生等。因此对蛋白磷酸化包括磷酸化类型、磷酸化肽段序列、磷酸化位点、磷酸化可逆过程的研究有助于人类深刻认识生命有机体。磷酸化的分析检测通常是通过生物质谱技术实现的。由于磷酸化蛋白在生物体内的表达量非常少,即使采用最先进的生物质谱技术也难以消除非磷酸化信息的干扰,质谱分析前对磷酸化蛋白样品预富集已经成为必须的样品前处理步骤之一。因此,制备具有磷酸化蛋识别性能的材料对于磷酸化蛋白组学的发展具有重要意义。本论文首次合成胍基衍生化的硅烷试剂,并以其为功能单体合成胍基修饰的磁性硅球,用于磷酸化蛋白的选择性识别与富集。通过傅里叶红外、扫面电子显微镜、透射电子显微镜、热重分析仪、X-射线光电子能谱、能谱、振动样品磁强计等技术对FG-1-2胍基修饰磁性材料进行表征,结果显示所制备材料粒径约为280nm的球形颗粒,其中胍基功能化层的厚度约70 nm,材料磁感应能力好。以常见的磷酸化蛋白(p-酪蛋白、卵清白蛋白)为模型蛋白,考察了材料的吸附性能。研究结果表明:材料不仅对磷酸化蛋白具有较高吸附容量(对β-酪蛋白和卵清白蛋白的最大吸附量分别达到63.4和74 mg/g)、较快的吸附速度(1h内达平衡),而且对磷酸化蛋白表现出较高的选择性,能从蛋白混合体系中选择性富集磷酸化蛋白。并考察了材料对实际样品(脱脂牛奶、鸡蛋清溶液)中磷酸化蛋白的选择性富集。结果表明材料显示出较高的选择性,有望进一步应用于其它复杂体系中磷酸化蛋白的选择性富集。
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