胰腺癌是一种恶性程度很高的消化道疾病,五年内生存率仅为6%,以“癌中之王”著称。由于手术治疗存在局限性,化疗仍是晚期胰腺癌的主流治疗手段。吉西他滨(Gemcitabine,GEM)是胰腺癌治疗的一线化疗药物,尽管它可以改善患者的临床症状,但在延长患者总生存期的作用仍然有限,主要原因是肿瘤干细胞(Cancer stem cells,CSCs)的存在而导致的耐药性。CSCs是肿瘤组织中存在的一小部分具有自我更新能力和多向分化潜能的细胞,在肿瘤发生、进展、复发的过程中都发挥着至关重要的作用。CSCs表达ABC转运蛋白,具有天然的抗化疗药物的能力,这成为胰腺癌治疗效果差,容易复发和转移的根本原因之一。因此,有效杀死CSCs有望克服胰腺癌的耐药性,从而彻底根除癌症。免疫疗法利用患者自身的免疫系统来抗击疾病,通过增强免疫系统对抗肿瘤,被证明是最有前途的治疗癌症的策略。由于胰腺癌肿瘤干细胞(Pancreatic cancer stem cells,PCSCs)表面低表达可以呈递内部抗原的主要组织相容性复合体I蛋白(Major histocompatibility complex,MHC I),内部异己抗原无法被T细胞识别,从而实现免疫逃逸。树突细胞(Dendritic cell,DC)是体内专职抗原呈递的细胞,通过向T细胞呈递异己抗原,诱导T细胞免疫应答。因此,基于树突细胞的肿瘤疫苗的应用,成为肿瘤免疫治疗的一个重要途径。外泌体(Exosomes)是由细胞分泌的包含DNA,RNA和蛋白质的40-150 nm的小囊泡,可以作为肿瘤抗原激活树突细胞,实现更精准地诱导抗肿瘤免疫反应。本课题利用单链抗体aCD11c修饰PCSCs来源的外泌体,得到能有效地靶向树突细胞的体系aCD11c-Exosomes。该体系能高效率的促使树突细胞对外泌体进行摄取、加工,将其携带的PCSCs异己抗原提呈给T细胞,T细胞进而靶向杀伤PCSCs,产生特异性强的抗肿瘤免疫反应。本课题采用超速离心的方法成功分离了平均粒径为73 nm的外泌体;通过将aCD11c与二棕榈酰磷脂酰乙醇胺-聚乙二醇-琥珀酰亚胺酯(DSPE-PEG-NHS)连接制备了aCD11c靶向配体;利用磷脂双链与外泌体膜表面的磷脂双分子层脂质嵌插原理制备了靶向树突细胞的体系aCD11c-Exosomes;通过多种实验手段在体外水平验证了该体系能有效的靶向到树突细胞,促使树突细胞成熟并呈递抗原给T细胞;建立BALB/c小鼠皮下荷瘤模型,体内水平验证了aCD11c-Exosomes能够诱导机体产生强的抗肿瘤免疫应答反应。本课题设计的基于外泌体的个体化肿瘤疫苗有望为临床攻克胰腺癌治疗这一难题提供重要的思路。