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金线莲[Anoectochilus roxburghii (Wall.) Lindl.]具有很高的药用价值以及观赏价值，但是随着人工开采和自然条件的恶化，其野生资源濒于枯竭。本试验以福建戴云山金线莲为材料，进行工厂化育苗的优化研究以及ISSR遗传稳定性检测。主要进行的工作包括：外植体无菌株系的建立，芽苗、原球茎、根状茎固液培养基的增殖研究；原球茎、根状茎分化芽苗以及生根壮苗移栽的试验研究；对不同继代次数的金线莲组培苗样品进行了ISSR遗传稳定性的分析。最后，通过试验中得到的技术参数建立金线莲工厂化育苗模式，并进行福建戴云山金线莲工厂化育苗的经济效益分析。主要研究结果如下：1福建戴云山金线莲工厂化育苗的主要技术研究本试验以福建戴云山金线莲为材料，进行了外植体无菌株系建立，不同培养基对芽苗、原球茎、根状茎的增殖影响，液体培养基和固体培养基的比较试验，不同处理对原球茎、根状茎分化芽苗的影响以及不同培养基对生根和壮苗的影响研究。①福建戴云山金线莲以茎段为外植体的无菌株系的建立。发现升汞消毒10min的效果最佳，其污染率最低，存活率最高。污染率和存活率分别为12.22%、82.22%。②福建戴云山金线莲芽苗、原球茎、根状茎增殖培养体系的优化，分别以金线莲的芽苗、原球茎以及根状茎为材料，比较不同盐以及6-BA和NAA的浓度对其增殖的影响。试验结果表明，金线莲芽苗增殖的最优培养基为1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L；原球茎增殖效果最好的培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L；根状茎增殖的最优培养基为MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.3mg/L。在优化培养基的基础上进行了液体培养基与固体培养基的比较，试验结果表明，液体培养基对金线莲增殖的影响明显优于固体培养基。在液体培养基中，芽苗增殖系数是固体培养基中的2.86倍，原球茎增殖系数是固体培养基的1.70倍，根状茎的增殖系数是固体培养基的1.20倍。③福建戴云山金线莲原球茎、根状茎分化芽苗的优化研究。分别以金线莲的原球茎和根状茎为材料，比较不同盐以及6-BA、NAA浓度对其分化芽苗的影响，利用赋值评分的方法进行统计分析，结果表明原球茎分化芽苗最优培养基为MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.1mg/L，总分为8.17，根状茎分化芽苗最优培养基为1/2MS+6-BA1.5mg/L+NAA0.01mg/L，总分为9.31。④福建戴云山金线莲的生根研究。以金线莲的芽苗为材料，比较不同浓度的AC、IBA和NAA对金线莲生根的影响。试验结果表明1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.3mg/L为金线莲生根最优培养基。⑤不同糖浓度以及添加物对福建戴云山金线莲壮苗的影响。以金线莲的芽苗为材料，在生根优化培养基的基础上进一步比较不同糖浓度、不同香蕉与马铃薯浓度的组合对金线莲壮苗的影响。以赋值评分的方法进行统计分析，试验结果表明：1/2MS+琼脂0.6%+NAA0.3mg/L+IBA1.0mg/L+白糖2%+马铃薯10%+香蕉10%为金线莲壮苗最优培养基。并且通过观察和分析发现，香蕉相对于马铃薯更有利于金线莲的增重。2福建戴云山金线莲组培苗移栽试验研究待到芽苗高3-4cm，具有2-3条以上不定根时，便可进行移栽，选择长势一致的金线莲组培苗作为移栽材料。进行不同基质，不同肥料浓度以及不同季节的比较试验。①不同基质的比较试验表明，泥炭土：椰糠：树皮：沙=3:3:1:2为最优的移栽基质。②以最优基质为基本移栽基质，比较不同肥料浓度对金线莲移栽的影响。试验结果表明花多多1号的4000倍液与花多多10号的3000倍液为适宜肥料浓度。③在前两步试验的基础上进行春季移栽试验，来对比春季和秋季两种季节对金线莲移栽的影响。试验结果表明秋季比春季更适合金线莲的移栽。3福建戴云山金线莲组培苗遗传稳定性的ISSR分析本试验选取0代、3代、6代、9代、12代、15代的金线莲组培苗进行遗传稳定性的ISSR检测。筛选出11条随机引物对金线莲的DNA进行PCR扩增，共扩增出94条谱带，0代、3代、6代、9代、12代、15代的变异率分别为10.64%、10.64%、8.51%、12.77%、11.70%、17.02%。0-15代的遗传相似性系数介于0.819-0.915之间，其遗传相似性系数很大。这说明福建戴云山金线莲虽然在组织培养的继代过程中发生了一定程度的变异，但是其遗传性状依然相对稳定。4福建戴云山金线莲工厂化育苗模式的建立与经济效益分析福建戴云山金线莲工厂化育苗主要技术链条为：无菌株系的建立→试管苗增殖培养（芽苗增殖或根状茎增殖）→试管苗生根壮苗培养→炼苗→穴盘移栽→上盆→销售。主要技术参数为：无菌株系的建立（0.1%HgCl2消毒10min）；增殖系数7.76（以芽苗增殖为例，以1/2MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.3mg/L为培养基）；生根与壮苗不是同步进行（生根以1/2MS+IBA1.0mg/L+NAA0.3mg/L为培养基），但是壮苗是在生根优化基质的基础上进行的（壮苗以1/2MS+琼脂0.6%+NAA0.3mg/L+IBA1.0mg/L+白糖2%+马铃薯10%+香蕉10%为培养基），其生根率可达100%，移栽成活率为95%以上（移栽基质为：泥炭土：椰糠：树皮：沙=3:3:1:2）。增殖和生根期间的污染率为5%，壮苗期间为10%。按照通过试验取得的技术参数，以年产100万株苗为例进行了金线莲工厂化育苗的效益分析。可知，所用的培养基配制成本、电费、水费、人工费、易耗品费用、折旧费以及移栽成本共计390511.58元，每株苗成本为0.39元，按市场价格每株0.6元，可获利209488.42元。其中发现水电费用最高，为172710.83元，占总成本的44.23%。人工费次之，为134115.75元，占总成本的34.34%。再者是折旧费，占到了11.42%。在总的成本中，培养基配制费用一共占到了4.88%，移栽基质以及穴盘比例占到了4.62%，易耗品费用占0.51%，比重不大。这说明主要成本消耗在水电费和人工费上。