在基因治疗中，非病毒载体因为具有安全性高、免疫原性低等优点日益得到重视，而解决靶向性是非病毒载体的重要研究内容。最常用的有效策略是以抗体和配体修饰非病毒载体，即将特定的抗体分子或配体分子与载体连接形成偶联体，从而使DNA能靶向性地转到表达特定抗原或受体的细胞内。　　 本研究以PEI为基因载体，以癌细胞高表达的G250抗原作为靶点，将G250单克隆抗体（G250mAb）和PEI偶联，构建了 G250 靶向非病毒基因载体，并进行一系列靶向转染实验。在此基础上，采用聚乙二醇（PEG）对靶向载体进行进一步修饰，改善其表面特性，提高非病毒基因载体在体内的基因转染效率。　　 对小鼠腹腔注射杂交瘤细胞，制备腹水；通过辛酸-硫酸铵沉淀法和蛋白A 琼脂糖亲和层析柱的方法纯化 G250mAb，并经 SDS-PAGE 及免疫组织化学染色对抗体进行鉴定。G250mAb 与 PEI 或 PEG 修饰的PEI 偶联，偶联产物经过葡聚糖 G-75 纯化，分别得到 G250-PEI 和 PEG-PEI-G250。进行了凝胶阻滞、DNase I 酶解、激光光散射等实验。对表达 G250 抗原的肾癌细胞（Ketr-3）、宫颈癌细胞（Hela）和不表达 G250 抗原的肝癌细胞（HepG2）、肾癌细胞（ACHN）、血管平滑肌细胞（SMC）进行了基因转染实验。此外还检验了血清浓度对基因转染效率的影响。分别采用流式细胞仪和化学发光检测仪测定基因转染效率。　　 免疫组织化学染色结果表明纯化的G250mAb 具有结合活性，可以与表达G250 抗原的肿瘤细胞特异性结合。G250-PEI 和 PEG-PEI-G250 能够与 DNA 形成纳米复合物，粒径分布较窄。PEI、PEG-PEI 经过 G250mAb 修饰，显著提高了载体的生物相容性。G250-PEI 对 Hela 细胞的转染效率分别 19 倍于 SMC 和 2倍于HepG2。G250抗体对PEI修饰前后对Hela的转染效率提高1倍，而对SMC、HepG2的转染效率没有明显差别。这说明G250mAb 的修饰使 PEI 获得了基因转染的靶向性。当存在游离的G250mAb 时，G250-PEI 对 Hela 的转染效率由63.2±4.0％下降为4.0±1.0％。游离的G250mAb 对 G250-PEI 和 PEI 转染 SMC没有明显影响。这证明了基因载体的靶向性是通过 G250 抗原与抗体作用所介导的。血清对基因转染效率有一定影响，随着血清浓度的增加，转染效率也有所下降。但是，PEG和G250mAb修饰的PEI（PEG-PEI-G250）对于Hela细胞的转染效率仍显著高于其他细胞。　　 总之，G250mAb修饰PEI使PEI获得了对Hela基因转染的靶向性，PEG修饰提高了PEI在血清存在条件下的转基因效率，更加有利于体内基因治疗。