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微卫星DNA又称短串联重复序列(Short tandem repeats，STRs)或简单重复顺序(Simple sequences repeats，SSRs)，是一类不编码的数目可变的重复DNA序列，多以2～6个核苷酸为重复单位，长度10～60bp，广泛分布于人类基因组及其他真核生物基因组中。由于微卫星DNA重复单位小，串联重复之后的长度较短，有利于应用PCR技术进行检测，所以被广泛用于基因作图的遗传标记、遗传病致病基因的连锁分析及基因位点缺失或杂合性缺失的研究。研究表明，微卫星DNA异常是人类大多数恶性肿瘤常见的遗传改变之一，而在正常组织中微卫星DNA却很少发生变异。肿瘤中微卫星DNA异常主要表现为微卫星不稳定性(microsatellite instability，MSI)和微卫星的杂合性缺失(loss of heterozygosity，LOH)。在同一个体中肿瘤组织与相应正常细胞中微卫星DNA长度存在一定的差异，表现为重复单元的增加或丢失，这种差异被称为微卫星不稳定性(MSI)；同一个体的正常细胞DNA中存在两个等位基因，而其肿瘤组织DNA中一个等位基因消失，被称为微卫星的杂合性缺失(LOH)。随着对微卫星DNA研究的深入，以微卫星DNA为肿瘤早期诊断标志物及其可行性的研究已成为当今肿瘤分子生物学研究的热点。 肺癌是当今世界上最常见的恶性肿瘤之一，其发生发展是一个多因素、多步骤、复杂的渐进过程。从支气管粘膜的过度增生、突变到真正的肿瘤形成，经历了一系列分子水平的基因改变和基因表达产物的异常。而微卫星DNA的变异是细胞恶性转化的多步骤基因改变中重要的标志之一。迄今为止，有关肺癌微卫星DNA变化的研究已有很多，但大多数的研究仅限于对肺癌组织中微卫星DNA的检测，对血液、支气管肺泡灌洗液中微卫星DNA变化的研究较少;对支气管冲洗液中微卫星DNA变化的研究尚未见报导;对微卫星DNA的变异与错配修复基因 (Mismatch rePair，MMR)、细胞周期调控因子及增殖细胞核抗原 (PCNA)在肺癌组织中表达的相关性研究更为罕见;有关对肺鳞癌微卫星DNA改变的相关多基因位点的系统研究，迄今在国内外亦未见报道。为探讨微卫星DNA改变与肺癌发生的关系及其在肺癌早期诊断中的意义和价值，本实验采用聚合酶链反应一银染法定性技术，以肺鳞癌患者癌组织、血液、支气管冲洗液为标本，选择染色体上20个基因位点，分析微卫星DNA的出现规律，以探讨微卫星DNA在肺癌早期诊断中的应用价值及在预测肺癌发生中的意义;同时应用免疫组织化学法检测hMLHI、PCNA、P53、PZI在肺癌组织中的表达，探讨其在肺癌微卫星DNA改变中的作用和相关关系。本实验分为以下两部分。郑州人学2003年博几l:研究生论文微卫星DNA改变与肺鳞癌发生关系的系列研究 第一部分肺鳞癌组织、血液及支气管冲洗液中微卫星DNA改变的相关研究 方法 1.选取20个基因位点，采用聚合酶链反应一银染法，分别对30例肺鳞癌患者的癌组织、血液及支气管冲洗液标本进行了微卫星DNA的检测;同时，对30例肺部良性疾患者的血液标本进行微卫星DNA的对照检测。故每种标本分别进行20只30二600次检测。 2.统计学处理:应用SPSS统计软件包，采用xZ检验、Fisher精确概率法、t检验、方差分析，对所有资料进行统计学分析。检验标准以P<0.05为差异有显著性，P<0.01为差异有高度显著性。 结果 1.肺鳞癌组织微卫星DNA的检测结果 1.1以实验位点分析，600次检测中，MSI出现率为13.3%(80/600)，LOH出现率为1 2.6%(76/600)，两者的总出现率为26.0%(156/600);其中，有8个微卫星位点MSI和/L OH均超过20.0%，分别是D351067D3S1447、D55346、D3S16ll、D951748、D3S1284、D3SlllO、D3 5 1 007。 1.2以30例实验病例分析，MSI、LOH、MSI和/L OH的阳性率分别为83.3%(25/30)、80.0%(24/30)、90.0%(27/30)。 (注:以上为以至少有1个位点异常为微卫星DNA改变的阳性标准所得出的结果) 2.血液标本微卫星DNA的检测结果郑州人学2003年博_!:研究生论文微一性星DNA改变几J肺鳞癌发生关系的系列研究 2.1以实验位点分析，600次检测中，MSI出现率为10.8%(65/600)，LOH出现率为9.3%(56/600)，两者的总出现率为20.2%(121/600)。 2.2以30例实验病例分析，MSI、LOH、MSI和几OH的阳性率分别为66.7%(20/30)、63.3%(19/30)、70.0%(21/30)。 (注:以上为以至少有1个位点异常为微卫星DNA改变的阳性标准所得出的结果) 2.3对照组血液标本中均为检测到MSI和LOH。 3.支气管冲洗液标本微卫星DNA的检测结果 3.1以实验位点分析，600次检测中，MSI出现率为1 1.7%(70/600)，LOH出现率为1 2.0%(72/600)，MSI和LOH出现率为23.7%(142/600)。 3.2以30例实验病例分析，MSI、LOH、MSI和几OH的阳性率分别为70.0%(21/30)、66.7%(20/30)、80.0%(24/30)。 (注:以上为以至少有1个位点异常为微卫星DNA改变的阳性标准所得出的结果) 4.实验组血液标本MSI、LOH、MSI和LOH出现次数分别是肺鳞癌组织的81.3%(65/80)、73.7%(56/76)、77.6%(121/1