【目的】构建人α-防御素HNP-1成熟肽酵母双杂交系统，以期为鉴定出α-防御素与肺上皮细胞反应的相关蛋白分子打下基础。【方法】培养HL-60细胞，提取RNA，RT-PCR扩增防御素HNP-1成熟肽的cDNA片段，克隆入pBluescript-SK-Ⅱ质粒，测序鉴定。EcoRⅠ、SalⅠ双酶切pBluescript-SK-Ⅱ—HNP-1和酵母表达载体pGBKT7，回收产物并连接，重组诱饵质粒命名为pGBKT7—HNP-1，酶切测序检测。用醋酸锂法将重组诱饵质粒转化酵母菌AH109，在SD／Trp^-，SD／Ade^-／Trp^-，SD／His^-／Trp^-，SD／Leu^-／Trp^-缺陷性培养基上观察pGBKT7—HNP-1在AH109中的表达情况，检测诱饵蛋白有无毒性作用和自激活功能。磁珠法提取人肺上皮细胞A549mRNA，用SMART技术，经LD-PCR扩增获得全长ds cDNA，转入酵母菌Y187构建A549细胞cDNA文库，同时进行文库滴定和杂交效率测定。将pGBKT7—HNP-1，人A549细胞ds cDNA及文库质粒pGART7／Rec^-顺序转化酵母菌AH109，β-半乳糖苷酶活性实验以及氨基酸营养缺陷培养双重筛选阳性克隆。然后用文库引物进行菌落PCR对候选阳性克隆进行初步鉴定。【结果】克隆的重组质粒pBluescript-SK-Ⅱ—HNP-1，以及亚克隆的重组诱饵质粒pGBKT7—HNP-1经测序鉴定证明其插入片段序列完全正确。pGBKT7—HNP-1转化酵母感受态AH109，在SD／Trp^-板上生长良好，在SD／Ade^-／Trp^-，SD／His^-／Trp^-，SD／Leu^-／Trp^-平板上不能生长，且在SD／Trp^-液体培养基中培养16h后，OD₆₀₀值达到系统要求。说明诱饵蛋白对酵母菌株AH109不具有毒性，且不具自主激活报告基因的功能。所构建的A549细胞的cDNA文库，库容量为1.7×10⁶转化子／3μg pGADT7／Rec^-，符合文库构建标准。酵母双杂交后经过双重筛选获得候选阳性克隆400余个，部分候选克隆菌落PCR显示其片段大小在100-1000bp之间。【结论】成功构建了HNP-1成熟肽重组诱饵质粒和人肺腺上皮A549细胞cDNA文库。以此为基础进行的酵母双杂交所获得的候选阳性克隆有可能筛选出与HNP-1成熟肽相互作用的蛋白分子。