用DNAstar软件包分别从HCMV、HSV-1、HSV-2和EBV的DNA聚合酶高保守基因区中设计一对共享序列引物，根据四种基因产物序列选择Sma I 和 BamH I作为限制性内切酶，对PCR产物进行酶切，从而做到在一个方法中，经一次PCR扩增并结合酶切即可区分四种病毒的感染。应用这一方法，分别检测了临床高危感染者血标本、孕期可疑宫颈分泌物和尿配对标本共99例，四种病毒扩增的产物分别是HCMV 594bp、HSV-1与 HSV-2均为522bp、EBV 528bp。HSV-1被SmaI酶切形成478和44 bp两个片段，但没有BamH I酶切位点；HSV-2被BamH I酶切后形成224和298bp两个片段，没有SmaI酶切位点；EBV各有一个SmaI和 BamH 酶切位点，分别切成101与427，246和282bp 四个片段；HCMV没有两种酶切位点。经Southern印记、CC法金标准对比、原位杂交和与单一四种PCR试剂进行了验证和评估，结果表明，单一PCR试剂盒和共享引物PCR酶切两种试剂的检测敏感性无明显的差异(X2 =0.29, P>0.05)，符合率达85.7%。与金标准比较，诊断敏感性、诊断特异性和诊断指数，分别为100%、92.3%和192.3%，均在理想范围内。PCR结果酶切法可作为一种简易，快速，敏感和特异的对四种疱疹病毒科病毒基因鉴别诊断试剂，从而为临床提供诊断参考。此法的建立对早期发现孕妇活动性HSV1或HCMV感染并及时予以特异治疗,防止和减少先天性畸形以及优生优育实验室监测工作有重要意