论文部分内容阅读
p27Kip1基因编码一个周期蛋白依赖性激酶抑制蛋白(cyclin-dependentkiBaseinhibitor,CKI),属对CDK(cyclin—dependentKinase)-cyclin复合物具有广谱抑制作用的p2i家族。其编码蛋白可与cyclinE-CDK2或cyclinD-CDK4复合物结合并抑制其活性,阻断细胞周期中Gl/S期的转换,实现对细胞周期的负调控。p27Kip1被认为是一种抑癌基因。p27的降解和亚细胞定位对于其功能发挥是必须的,与特定位点的磷酸化有关。
本实验主要采用由PCR介导的基因定点诱变技术,得到p27Kip1基因三个重要磷酸化位点的突变体,并构建含p27Kip1。基因野生型和突变型的载体pEYFP,用脂质体转染肝癌细胞。检测肝癌细胞中p27表达对细胞周期的影响。结果表明,转染了p27Kip1基因的HepG2细胞,细胞周期进程受到明显抑制。