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结核分枝杆菌是典型的胞内寄生菌,主要靶细胞是巨噬细胞,但树突状细胞能显著激活初始型T细胞,启动T细胞免疫应答反应,是细胞免疫反应的重要启动者。MicroRNAs作为一类18-22 nt的小分子,其调控作用广泛存在真核生物的各个进程,而且在免疫方面尤为重要,本研究采用miRNA芯片明晰BCG感染前后DCs中miRNA表达谱的变化,以发现可能参与DCs调控结核分枝杆菌感染相关miRNA,并采用Real time PCR进行初步验证,为阐明DCs抗结核分枝杆菌的特异性miRNA调控机制奠定基础。
1、成功分离并培养出健康人外周血来源的树突状细胞,经过BCG感染DCs前后MicroRNA芯片检测,显示miRNA表达谱的差异,上调的有hsa-miR-1270;hsa-miR-147b;hsa-miR-3201;hsa-miR-132;hsa-miR-3611;hsa-miR-155;hsa-miR-1973;hsa-miR-934;hsa-miR-106b*等30个,下调的有hsa-miR-27b;hsa-miR-151-5p;hsa-miR-374c;hsa-miR-425;hsa-miR-125b;hsa-miR-361-5p;hsa-miR-320c;hsa-miR-130a等32个,这些miRNA可能在DCs抗结核分枝杆菌的感染中起着重要的作用。
2、成功采用颈环引物捕捉成熟miRNA,并反转录成cDNA,构建了T载体,采用绝对定量对其中的4个miRNA分子进行了Real time PCR分析,结果显示BCG作用后,树突细胞中miR-155,miR-146a,miR-132表达上调(P<0.01),miR-200c表达下调,与芯片检测结果一致,进一步验证了BCG作用后DCs中miRNA的差异表达。