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目的:子宫颈癌是女性生殖系统中第二常见的恶性肿瘤,仅次于乳腺癌。侵袭和转移是引起患者治疗后复发和死亡的主要原因。近年来,上皮间质转化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)与肿瘤的侵袭和转移的关系成为研究热点。FMNL2(formins like 2)基因是形成素蛋白(Formins)家族成员之一。Formins蛋白为肌动蛋白成核因子,参与众多以肌动蛋白为基础的过程,并常在病理情况下如肿瘤分化、侵袭和转移中表达失调。本研究重点探讨FMNL2基因在子宫颈癌组织中的表达和与子宫颈癌EMT的关系,旨在揭示FMNL2参与子宫颈癌转移的新途径,为肿瘤转移机制的研究提供新线索。方法:1、免疫组织化学技术检测实验组73例子宫颈鳞状细胞癌(鳞癌,29例淋巴结转移性子宫颈鳞癌),39例子宫颈腺癌(12例淋巴结转移性子宫颈腺癌)及对照组30例子宫肌瘤切除患者正常子宫颈组织中的FMNL2、E-cadherin、Vimentin的表达情况并作相关统计分析。2、体外培养人子宫颈腺癌Hela细胞株,鳞癌Siha细胞株,实验组用含浓度100nmol/L的siRNA的培养基分别与Hela、Siha细胞共同孵育72h,对照组用不含siRNA的培养基分别与Hela、Siha细胞共同孵育72h后。检测:(1)半定量RT-PCR法检测实验组及对照组FMNL2、上皮间质转化相关标记物Vimentin,E-cadherin的mRNA的表达情况并分析其相关性;(2)细胞免疫组织化学方法检测实验组及对照组FMNL2、上皮间质转化相关标记物Vimentin,E-cadherin蛋白的表达情况并分析其相关性;(3)CCK8法检测实验组及对照组细胞增殖的情况;(4)划痕实验检测实验组与对照组细胞的迁徙能力的变化。结果:1、子宫颈癌组织免疫组织化学检测结果显示:(1)FMNL2、Vimentin、E-cadherin在子宫颈鳞状上皮组织、子宫颈鳞癌组织、淋巴结转移性子宫颈鳞癌组织中的表达为FMNL2:6.67%、67.12%、51.72%,Vimentin:0、30.14%、34.48%,E-cadherin:100%、72.60%、68.97%;在子宫颈腺体、子宫颈腺癌组织、淋巴结转移性子宫颈腺癌组织组织中的表达为 FMNL2:13.33%、66.67%、58.33%,Vimentin:0、41.03%、41.67%,E-cadherin:100%、64.10%、66.67%。(2)FMNL2 在子宫颈癌组织中的表达明显高于正常子宫颈组织,差异具有统计学意义(鳞癌χ2=31.088,p=0.000,腺癌χ2=19.627,p=0.000);Vimentin 在子宫颈癌组织中的表达明显高于正常子宫颈组织,差异均有统计学意义(鳞癌p=0.000;腺癌p=0.000)。E-cadherin在子宫颈癌组织中的表达明显低于正常子宫颈组织,差异具有统计学意义(鳞癌p=0.000;腺癌p=0.000)。子宫颈癌组织中FMNL2与Vimentin的表达呈正相关(鳞癌r=0.269,p=0.029;腺癌r=0.369,p=0.037),与 E-cadherin 的表达呈负相关(鳞癌 r=-0.299,p=0.011;腺癌r=-0.332,p=0.049)。(3)FMNL2、Vimentin、E-cadherin在子宫颈癌和淋巴结转移性子宫颈癌的表达差异(FMNL2:鳞癌χ2=2.105,p=0.147,腺癌χ2=0.279,p=0.597;Vimentin:鳞癌χ2=0.182,p=0.670;腺癌χ2=0.002,p=0.969;E-cadherin:鳞癌χ2=0.135,p=0.713,腺癌χ2=0.026,p=0.871)、子宫颈鳞癌与腺癌组织中的表达差异(FMNL2:χ2=0.002,p=0.961;Vimentin:χ2=1.344,p=0.246;E-cadherin:χ2=0.869,p=0.351)及淋巴结转移性子宫颈鳞癌与淋巴结转移性子宫颈腺癌组织中的表达差异(FMNL2:χ2=0.149,p=0.699;Vimentin:χ2=0.189,p=0.664;E-cadherin:χ2=0.021,p=0.886)均无统计学意义。2、RT-PCR 结果:(1)FMNL2 的mRNA的相对灰度值实验组低于对照组,差异具有统计学意义(Hela细胞t=-10.568,p=0.000;Siha细胞t=-5.766,p=0.004),两种细胞株的对照组相比较,FMNL2的mRNA在Hela细胞中的相对灰度值高于Siha细胞,差异具有统计学意义(t=3.755,p=0.020)。(2)Vimentin的mRNA的相对灰度值实验组低于对照组,差异具有统计学意义(Hela细胞t=-7.056,p=0.002;Siha细胞t=-2.800,p=0.049);两种细胞株的对照组相比较,Vimentin的mRNA在Hela细胞中的相对灰度值高于Siha细胞,差异具有统计学意义(t=16.768,p=0.000)。(3)E-cadherin的mRNA的相对灰度值实验组高于对照组,差异具有统计学意义(Hela细胞t=7.545,p=0.002;Siha细胞t=10.066,p=0.000);两种细胞株的对照组相比较,E-cadherin的mRNA在Hela细胞中的相对灰度值低于Siha细胞,差异具有统计学意义(t=-4.311,p=0.012)。(4)两种细胞株FMNL2表达下调后,Vimentin的mRNA表达均下调,E-cadherin的mRNA表达均上调。3、细胞免疫组织化学结果显示:(1)FMNL2蛋白的平均光密度值实验组低于对照组,差异具有统计学意义(Hela细胞t=-28.000,p=0.000;Siha细胞t=-12.886,p=0.000),两种细胞株的对照组相比较,FMNL2在Hela细胞中的平均光密度值高于Siha细胞,差异具有统计学意义(t=3.273,p=0.017)。(2)Vimentin蛋白的平均光密度值实验组低于对照组,差异具有统计学意义(Hela 细胞t=-16.047,p=0.000;Siha 细胞t=-11.887,p=0.000);两种细胞株的对照组相比较,Vimentin蛋白在Hela细胞中的平均光密度值高于Siha细胞,差异具有统计学意义(t=23.669,p=0.000)。(3)E-cadherin蛋白的平均光密度值实验组高于对照组,差异具有统计学意义(Hela细胞t=5.539,p=0.002;Siha细胞t=7.498,p=0.000);两种细胞株的对照组相比较,E-cadherin蛋白在Hela细胞中的平均光密度值低于Siha细胞,差异具有统计学意义(t=-27.001,p=0.000)。(4)两种细胞株FMNL2表达降低后,Vimentin蛋白表达均降低,E-cadherin蛋白表达均增高。4、增殖变化:CCK-8检测结果显示,两种细胞株中FMNL2基因表达下调后,实验组与对照组抑制率差异无统计学意义(p>0.05)。5、迁移变化:划痕实验结果显示,实验组Hela及Siha细胞的24h、48h的愈合率分别为45%、53%及42%、47%。对照组Hela及Siha细胞的愈合率为89%、97%及83%、91%,实验组与对照组相比迁移能力明显减弱(p<0.05)。结论:1、FMNL2基因可能在子宫颈癌的发生、发展,侵袭、转移中有促进作用;2、FMNL2可能通过促进子宫颈EMT,增强子宫颈癌侵袭、转移;3、子宫颈癌Hela、Siha细胞株存在EMT,Hela细胞株更明显;4、沉默FMNL2基因可能对子宫颈癌的EMT具有一定的抑制作用;5、沉默FMNL2基因可能抑制子宫颈癌细胞株的迁移能力。